[发明专利]一种KLF4在细粒棘球蚴感染早期对巨噬细胞极化的研究方法

权利要求书

1.一种KLF4在细粒棘球蚴感染早期对巨噬细胞极化的研究方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、通过体外实验探讨原头蚴对巨噬细胞极化的影响；

建立细粒棘球绦虫原头蚴与RAW264.7细胞共培养体系，分别在12,36,48,84h收集细胞和培养上清液，qRT-PCR检测KLF4，M1(TNF-α、IL-6、MCP-1)，M2(Arg-1、Fizz-1、MR)巨噬细胞因子的表达；ELISA检测相关因子分泌的含量；

步骤2、通过体内实验探讨细粒棘球蚴感染早期对巨噬细胞极化的影响；

采用腹腔接种法建立小鼠细粒棘球蚴感染模型，BALB/c小鼠随机分组，实验组：0.2mL/只(原头蚴浓度：10000个/mL)；对照组：PBS 0.2mL/只；分别于第1、5、10、15天处死小鼠，收集腹腔巨噬细胞及外周血；qRT-PCR检测KLF4，M1(TNF-α、IL-6、MCP-1、iNOS)，M2(IL-10、TGF-β、Arg-1、Fizz-1、MR)巨噬细胞因子的mRNA表达；Western Blot检测KLF4、iNOS、Arg-1及IκB的蛋白表达；ELISA检测血清M1(IL-6、MCP-1)，M2(Arg-1、MR)巨噬细胞因子的表达；

步骤3、通过干扰KLF4的转录探讨其在巨噬细胞极化中的作用；

建立原头蚴与腹腔巨噬细胞共培养体系，12、24、36、48h收集细胞，qRT-PCR检测KLF4，M1(IL-1β、IL-6、MCP-1)，M2(IL-10、TGF-β、Arg-1、Fizz-1、MR)巨噬细胞因子的mRNA表达；Western Blot检测KLF4、iNOS、Arg-1及IκB的蛋白表达；通过小干扰RNA沉默KLF4，原头蚴刺激腹腔巨噬细胞，48h收集细胞，重复上述实验。

2.根据权利要求1所述的KLF4在细粒棘球蚴感染早期对巨噬细胞极化的研究方法，其特征在于，步骤1中，原头蚴与RAW264.7细胞共培养，实验组(84h)的KLF4mRNA水平较对照组明显升高；随着感染时间延长，M2巨噬细胞Arg-1、Fizz-1、MR的mRNA和蛋白水平呈上升趋势，M1巨噬细胞的TNF-α、IL-6、MCP-1的mRNA和蛋白水平呈先升后降趋势。

3.根据权利要求1所述的KLF4在细粒棘球蚴感染早期对巨噬细胞极化的研究方法，其特征在于，步骤2中，细粒棘球蚴感染小鼠早期，腹腔巨噬细胞中KLF4的mRNA及蛋白表达水平上调；M1巨噬细胞相关因子的mRNA及蛋白表达水平先升高后下降；M2巨噬细胞相关因子的mRNA及蛋白表达水平呈上升趋势；IκB的蛋白表达也随感染时间延长而升高。

4.根据权利要求1所述的KLF4在细粒棘球蚴感染早期对巨噬细胞极化的研究方法，其特征在于，步骤3中，

a)原头蚴与腹腔巨噬细胞共培养12、24、36、48h后，KLF4的mRNA及蛋白表达上调，48h达高峰；IL-1β、MCP-1、IL-6、iNOS的表达水平下降，IL-10、TGF-β、Arg-1、Fizz-1、MR的表达在感染后期升高，48h有显著差异；IκB蛋白在36h开始升高，48h达峰值；

b)沉默KLF4后，原头蚴刺激腹腔巨噬细胞，KLF4表达降低，M1巨噬细胞表达水平上调，M2巨噬细胞表达下降，IκB蛋白表达也下降。