[发明专利]胶质瘤诊断标志物circ7:42148226|42148468及应用

说明书

本发明属于生物技术领域，公开了胶质瘤诊断标志物circ7:42148226|42148468及应用。在本发明中，首次发现：胶质瘤细胞所分泌的外泌体对circ7:42148226|42148468具有明显的富集作用；同时发现胶质瘤患者血清外泌体中circ7:42148226|42148468的表达水平相比于对照组明显降低(p0.0001)，ROC分析则显示其对胶质瘤具有较高诊断价值(AUC＝0.850，P＝0.001，灵敏度和特异性分别为75.0％和96.0％)。因此通过检测胶质瘤患者血清外泌体中circ7:42148226|42148468的表达水平，可对胶质瘤患者做出早期、快速的无创性诊断。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种用于胶质瘤诊断的血清circRNA标志物circ7:42148226|42148468、以及检测该标志物的试剂用于制备胶质瘤诊断制剂的应用、还有试剂盒。

背景技术

脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的恶性肿瘤，是中枢神经系统的主要疾病之一，居颅内原发性肿瘤发病率的首位。由于其高侵袭性、高复发率的特点使得胶质瘤治愈率低，患者生存期短。神经影像学技术和显微外科技术的不断进展对神经外科的发展起了巨大的促进作用，而分子生物学研究的不断深入为肿瘤的基因治疗提供了广阔前景然而对脑胶质瘤的患者生存率并没有明显提高。因此，寻找胶质瘤诊断标志物对高危人群进行筛查，并相应地选择合理的后续治疗方案，提高生存率，是神经科学领域亟待解决研究任务。

circRNA是一类广泛且多样地存在于哺乳动物细胞中、具有调控基因表达作用的内源性非编码RNA分子，具有共价闭合的环形结构，广泛存在于各种细胞中，也是继microRNA(miRNA)后RNA家族的最新研究热点。近年来，随着深度测序技术的广泛应用和生物物理和信息学技术的快速发展，人们发现人类许多外显子的转录本可被非线性地反向剪接或通过基因重排而形成circRNA，且它们在所有剪接转录本中占了相当大的比例。近年来逐渐发现外泌体中也含有大量的circRNA，可能发挥重要作用。目前，由于circRNA具有丰富性、稳定性、高保守性和时空特异性等特点，在肿瘤诊断标志物方面正发挥越来越大的作用。

发明内容

本发明的第一个目的是：提供一种用于胶质瘤诊断的血清外泌体circRNA标志物。

主要内容包括：一种用于胶质瘤诊断的血清外泌体circRNA标志物circ7:42148226|42148468，其序列如SEQ NO:1所示。该circRNA位于人类的第7号染色体上，全长243bp。

本发明的第二个目的是，提供检测所述的circRNA标志物在血清外泌体中表达量的试剂在制备胶质瘤诊断制剂中的应用。

本发明的第三个目的是，提供一种胶质瘤诊断试剂盒，其能够测定血清外泌体中的circ7:42148226|42148468的含量。

所述的胶质瘤诊断试剂盒，含有检测circ7:42148226|42148468含量的PCR引物。优选引物的序列如SEQ NO:2和3所示。

所述的胶质瘤诊断试剂盒，除circ7:42148226|42148468的引物外，还含有从血清中提取外泌体、由外泌体中提取RNA并进行逆转录及荧光定量PCR的所有试剂。

包括：

(1)提取血清外泌体所需试剂：Total Exosome Isolation Reagent(fromserum)，可由Invitrogen公司购得，货号4478360；

(2)提取外泌体RNA所需试剂：Trizol试剂、三氯甲烷、异丙醇、75％乙醇、无酶水；

(3)逆转录所需试剂：随机引物(Random Primer)、无酶水、5×逆转录缓冲液、三磷酸碱基脱氧核苷酸、RNA酶抑制剂、MMLV逆转录酶；