[发明专利]一种GS表达系统细胞株的筛选方法有效
| 申请号： | 201711452716.5 | 申请日： | 2017-12-28 |
| 公开（公告）号： | CN108085337B | 公开（公告）日： | 2020-10-16 |
| 发明（设计）人： | 张文宇;马燕玲;阮卡;邹有土;王明灶;葛平辉;章永垒;陈星 | 申请（专利权）人： | 未名生物医药有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/64;C12N5/10 |
| 代理公司： | 厦门市精诚新创知识产权代理有限公司 35218 | 代理人： | 秦华 |
| 地址： | 361000 福建省厦*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 gs 表达 系统 细胞株 筛选 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种GS表达系统细胞株的筛选方法，其特征在于，筛选步骤如下：
S1：含目的基因的表达载体转染宿主细胞后在蛋氨酸亚氨基代砜加压条件下，于37℃，5％CO2培养箱中培养3～4周,检测发酵液表达量，根据OD值筛选出阳性克隆细胞；将所得的阳性克隆细胞放大培养到细胞活率达到85％以上；
S2：对S1所得阳性克隆细胞用有限稀释法进行单克隆化筛选，筛选时需在96孔板中加入密度为1×104～1×105个/孔的宿主细胞并于37℃，5％CO2培养箱中培养，3～5周后观察96孔板中细胞生长情况，检测发酵液表达量，筛选出阳性单克隆细胞株，即得GS表达系统细胞株；
所述宿主细胞为CHOK1SV细胞或敲除了GS基因的CHO细胞；
所述检测发酵液表达量的方法为HPLC法或ELISA法。
2.根据权利要求1所述的GS表达系统细胞株的筛选方法，其特征在于，所述含目的基因的表达载体为GS合成酶—CMV启动子—轻链—CMV启动子—重链的重组质粒。
3.根据权利要求1所述的GS表达系统细胞株的筛选方法，其特征在于，所述GS表达系统为将携带GS基因的表达载体转染至宿主细胞；所述表达载体的GS基因下游插入了抗体重链和轻链基因。
4.根据权利要求1所述的GS表达系统细胞株的筛选方法，其特征在于，S1中所述表达载体为含GS基因的真核表达载体。
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