[发明专利]长效重组人促红素的生产方法在审
| 申请号： | 201711452469.9 | 申请日： | 2017-12-27 |
| 公开（公告）号： | CN107937425A | 公开（公告）日： | 2018-04-20 |
| 发明（设计）人： | 程度胜;桑建彬;薛霞;韩明娣;龙应国 | 申请（专利权）人： | 北京四环生物制药有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/62 | 分类号： | C12N15/62;C07K19/00;C07K1/22;C07K1/16 |
| 代理公司： | 北京同辉知识产权代理事务所(普通合伙)11357 | 代理人： | 孙艳敏 |
| 地址： | 100176*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 长效 重组 人促红素 生产 方法 | ||
1.一种长效重组人促红素的生产方法，包括如下步骤；
(1)将人IgG2的Fc片段基因连接到人促红素基因的3′端，利用脂质体将含有hEPO-Fc重组基因的质粒转染CHO细胞；CHO细胞用无血清基质经扩增培养，在培养液中分泌表达rhEPO-Fc融合蛋白；
(2)培养液经过离心，取上清液，调pH值至3.5-4.0，上清液变浊，离心或过滤除去沉淀物；
(3)除去沉淀物后的含目的蛋白溶液上rProtein A Beads层析柱进行层析分离，得粗rhEPO-Fc融合蛋白；
(4)粗rhEPO-Fc融合蛋白用分子筛Superdex 200 prep grade进行纯化，得精rhEPO-Fc融合蛋白。
2.如权利要求1所述的长效重组人促红素的生产方法，其特征在于：步骤(2)中调节pH采用盐酸溶液。
3.如权利要求1所述的长效重组人促红素的生产方法，其特征在于：所述步骤(3)为：
将步骤(2)除去沉淀物后的溶液，用NaOH调节pH值到中性，上rProtein A Beads层析柱，柱规格5cm*8cm，然后用5倍柱体积的pH7.0的缓冲液进行洗杂，所用缓冲液为0.15MNaCl-20mMNa2HPO4，然后用10倍柱体积pH3.0的0.1M甘氨酸洗脱液进行洗脱，收集洗脱液，用NaOH调节pH值到中性。
4.如权利要求1所述的长效重组人促红素的生产方法，其特征在于：所述步骤(4)上分子筛纯化过程为：分子筛Superdex 200 prep grade层析柱先用pH7.0的150mMNaCl缓冲液平衡，再将样品上柱纯化。
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