[发明专利]一种肝干细胞注射液及其制备方法

说明书

本发明涉及一种肝干细胞注射液及制备方法。所述注射液由肝干细胞、脐带血干细胞、苯甲醇、天冬酰胺、谷氨酰胺、异亮氨酸、脯氨酸、透明质酸、转铁蛋白、黄精多糖、牛磺酸、黄体酮按照一定的分量比组成。本发明所述的肝干细胞注射液中，肝干细胞和脐带血干细胞相配合，对糖尿病治疗效果更佳；本发明所述的注射液配方可以长时间维持肝干细胞活性，且无任何毒副成分，安全有效，成本低廉，可直接应用与糖尿病临床注射。

技术领域

本发明属于生物医药领域，特别涉及一种肝干细胞注射液及其制备方法。

背景技术

在20世纪早期，有学者通过一些实验现象推测成熟的肝脏具有很强的再生能力，因为其中存在着一群可分化为肝细胞和胆管细胞的“祖先”细胞。目前人们对肝干细胞的存在已形成广泛共识，它是一种具有自我更新能力和多向分化潜能的干细胞，可以通过自身对称性和不对称性分裂产生表现型和基因型与自身完全相同的干细胞，也能产生肝脏组织中不同发育阶段和不同分化方向的细胞，如肝细胞、胆管上皮细胞和胰腺上皮细胞等。随着对其特性的深入了解，它将代替肝细胞移植和肝脏移植成为治疗器官衰竭的一种重要细胞来源，在肝细胞移植、体外人工肝、基因治疗方面均有着巨大的潜力，目前现有技术中已有利用流产胎儿的肝脏组织培养肝脏干细胞用于治疗糖尿病的先例，病取得了良好的疗效。

由肝干细胞制备的干细胞注射液在临床上可以用于治疗肝硬化或糖尿病等。然而与普通生物制品和药品不同，干细胞注射液的活性物质是细胞，细胞在离体环境中，活性会迅速下降，传统方法用含人血白蛋白的氯化钠注射液对肝干细胞进行保存，在8-24h以内，细胞活性即大幅下降，无法长期保证细胞活性，例如中国专利CN102948413B中公开的肝干细胞保存液，主要由人血白蛋白、氯化钠、葡萄糖酸钠、醋酸钠、氯化钾、氯化镁和肝素钙组成，将肝干细胞重悬于所述保存液中即形成注射液，细胞保存能力较差。大量研究发现，用含有胎牛血清或细胞培养基的保存液可以解决细胞活性下降的问题，但是细胞接触胎牛血清时会内吞胎牛血清，进而引起细胞某些蛋白表达特性的变化，细胞回输人体后可能引起过敏反应，且血清中含有大量未知成分，不能临床使用。

发明内容

本发明的特征在于在前人研究的基础上，提供了一种肝干细胞注射液，能够长时间维持肝干细胞的活性，以及肝干细胞体外培养方法及专用培养基，达到抑制分化，同时给予适当的营养位置及生长因子以促进增殖的目的。

为实现上述目的，本发明具体技术方案如下：

本发明一方面提供了肝干细胞在治疗糖尿病的注射液中的应用。

本发明另一方面提供了一种治疗糖尿病的肝干细胞注射液，该注射液包括肝干细胞、脐带血干细胞和注射混合液；每ml注射混合液含7×105-5×106个肝干细胞和2×103-1×104个脐带血干细胞；所述注射混合液由以下质量百分比成分组成：1-5％的苯甲醇、3-4％的天冬酰胺、3-5％的谷氨酰胺、3-5％的异亮氨酸、3-6％的脯氨酸、0.5-0.9％的透明质酸、3-5％的转铁蛋白、3-5％的黄精多糖、0.3-0.5％的牛磺酸和0.5-1.0％的黄体酮；余量为生理盐水。

本发明所述的肝干细胞注射液配方可以长时间维持肝干细胞活性，且无任何毒副成分，安全有效，成本低廉。

本发明另一方面还提供了注射液的制备方法，该方法包括如下步骤：

1)肝干细胞的培养；

2)脐带血干细胞的培养；

3)将苯甲醇、天冬酰胺、谷氨酰胺、异亮氨酸、脯氨酸、透明质酸、转铁蛋白、黄精多糖、牛磺酸和黄体酮溶于生理盐水中配制成复方溶液，4℃预冷备用；