[发明专利]一种红牙刷石斛组培扩繁育苗的方法

权利要求书

1.一种红牙刷石斛组培扩繁育苗的方法，包括以下步骤：

1)外植体的选择：选外种壳黄绿色、完好无裂的果荚作为外植体，冷藏；

2)外植体的消毒：取步骤1)得的外植体，用洗涤液浸泡，刷净果荚表皮，洗净，在无菌环境下用医用酒精浸泡消毒，再依次采用次氯酸钠、升汞消毒，冲洗干净；

3)播种：将步骤2)消毒后的外植体解剖，取果荚中的果粉，将果粉撒至初代培养基，置于24℃-26℃、光照强度为1500-2000lx，光照时间为10-12小时/天的条件下，培养至果粉萌发；所述初代培养基为含有萘乙酸、蔗糖、琼脂粉、无机离子和维生素B的1/2MS培养基；

4)继代培养：果粉萌发后，将光照强度上调400-600lx，继续培养至种苗长至2-3cm，移至继代培养基，培养至种苗长至5-6cm；所述继代培养基为含有萘乙酸、6-BA、蔗糖、琼脂粉、土豆汁和活性碳粉的1/2MS培养基；

5)生根培养：将继代培养后的种苗置于生根培养基中继续培养，所述生根培养基为含有萘乙酸、6-BA、蔗糖、琼脂粉、土豆汁、香蕉汁和活性碳粉的MS培养基；

6)炼苗、驯化移栽：待根充分发育后，将种苗连同生根培养基置于大棚中炼苗；将种苗取出清洗，用多菌灵稀释液浸泡，洗净阴干水分，将种苗至于基质中驯化。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中，选择健康的红牙刷石斛2-4年的母本植株，人工授粉，培育，得果荚。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中，次氯酸钠的浓度为2wt％；升汞的浓度为0.1wt％。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中，初代培养基中的无机离子包括钾、钙、钠、镁、锌、锰、铜、钴和亚铁；所述的维生素B包括烟酸、盐酸硫胺素和盐酸吡哆醇。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中，初代培养基为含有最终浓度如下所示的以下组分的1/2MS培养基：1890-1900mg/L硝酸钾，1640-1650mg/L硝酸铵，440-445mg/L二水氯化钙，370-375mg/L七水硫酸镁，160-170mg/L磷酸二氢钾，0.8-0.83mg/L碘化钾，6.0-6.2mg/L硼酸，22.3-23.0mg/L四水硫酸锰，8.6-9.0mg/L七水硫酸锌，0.2-0.25mg/L钼酸钠，0.025-0.28mg/L五水硫酸铜，0.028-0.03mg/L氯化钴，27.5-29mg/L硫酸亚铁，23-25mg/L乙二胺四乙酸，96-100mg/L肌醇，0.2-0.3mg/L烟酸，0.25-0.35mg/L盐酸吡哆醇，0.8-0.9mg/L甘氨酸，0.2-0.3mg/L盐酸硫胺素，20-30g/L蔗糖、4.8-6.0g/L琼脂粉、0.1mg/L的萘乙酸、2％的蔗糖和4.8g/L的琼脂粉。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中，所述果粉与初代培养基的播种密度为0.08-0.12g的果粉/30mL初代培养基。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4)中，继代培养基为含有最终浓度如下所示的以下组分的1/2MS培养基：0.5mg/L的萘乙酸、1.5mg/L的6-BA、3％的蔗糖、4.8g/L的琼脂粉、35g/L的土豆汁、0.3g/L的活性碳粉；所述继代培养基的pH值为5.8-6.0。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤5)中，生根培养基为含有最终浓度如下所示的以下组分的MS培养基：2.0mg/L的萘乙酸、1.0mg/L的6-BA、3％的蔗糖、4.8g/L的琼脂粉、35g/L的土豆汁、25g/L的香蕉汁和3g/L的活性碳粉；所述生根培养基的pH值为5.8-6.0。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤6)中，大棚的光照强度为3000lx-6000lx，湿度为65％-75％。

10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤6)中，基质为粉末状的松树皮、锯末、有机肥、蛭石按(1-2):(1-2):(1-2):1的重量比均匀而成。