[发明专利]一种肿节石斛的组织培养方法

权利要求书

1.一种肿节石斛的组织培养方法，其特征在于，包括：

外植体选择步骤：选择2-4年生的肿节石斛母本植株，取成熟果荚，置于3-7℃的环境下保存；

预处理步骤：将成熟果荚以碱性溶液浸泡，并清理表面，然后以水冲洗；在无菌环境下以体积百分比浓度75％的酒精浸泡30-60s并同时搅拌，以水冲洗；用体积百分比浓度为2％的次氯酸钠消毒1-2min，以水冲洗；最后用体积百分比浓度0.1％的升汞消毒6-8min，以水冲洗，待用；

播种步骤：剖开已预处理的成熟果荚取种子，将种子播撒于组培瓶中的种子培养基上，无菌密封，在温度为24-26℃、光照强度为2000-2500Lx、光照时间为10-12h/d的条件下培养使其萌发；

继代培养步骤：将萌发的种子置于光照强度为2000-2500Lx、光照时间为10-12h/d的条件下培养使其成苗并长至2-3cm；将苗移至育苗培养基中培养，至其高度为5-6cm；

生根培养步骤：将经继代培养的苗移至生根培养基中培养；

炼苗、驯化移栽步骤：将经生根培养的苗移至自然环境放置15-30d；然后打开组培瓶的瓶盖放置3-5d；取出苗并用多菌灵溶液浸泡根部15-20min，洗净并移栽至基质中进行驯化。

2.如权利要求1所述的组织培养方法，其特征在于，外植体选择步骤中，选择3年生的肿节石斛母本植株，在肿节石斛开花期间进行人工授粉，使其长出果荚，待果荚为外种壳黄绿色、完好无裂则是成熟果荚。

3.如权利要求1所述的组织培养方法，其特征在于，预处理步骤中，用碱性溶液浸泡15-20min，并清理表面，以水冲洗10-15min。

4.如权利要求1所述的组织培养方法，其特征在于，预处理步骤中，酒精浸泡后、次氯酸钠消毒和升汞消毒后，以无菌水冲洗。

5.如权利要求1所述的组织培养方法，其特征在于，播种步骤中，以经消毒和冷却处理的解剖刀和镊子配合取出种子。

6.如权利要求1所述的组织培养方法，其特征在于，所述种子培养基包括：

蔗糖体积百分比浓度2％

琼脂粉4.8g/L；

种子培养基的pH为5.8-6。

7.如权利要求1所述的组织培养方法，其特征在于，所述播种步骤中，培养30-35d使其萌发。

8.如权利要求1所述的组织培养方法，其特征在于，继代培养步骤中，育苗培养基包括：

育苗培养基的pH为6。

9.如权利要求1所述的组织培养方法，其特征在于，生根培养步骤中，所述生根培养基包括：

10.如权利要求1所述的组织培养方法，其特征在于，用经稀释800-1000倍的多菌灵溶液浸泡根部。