[发明专利]一种玫瑰石斛组织培养扩繁的方法

权利要求书

1.一种玫瑰石斛组织培养扩繁的方法，其特征在于包括：

外植体选择步骤：选择玫瑰石斛母本植株，对其人工授粉，让其长出果荚，继续培育，待果荚成熟后，将其采摘保存；

外植体消毒步骤：取出果荚放入培养瓶中，先洁净果荚，然后对果荚外壳进行一次消毒1-2min，然后用无菌水冲洗3-4次，再进行二次消毒6-8min，然后用无菌水冲洗4-5次，备用；

播种步骤：将消毒后的果荚解剖开露出黄色果粉，将果粉撒到第一1/2MS培养基上，封上培养瓶的瓶盖，培养至种子萌发；

继代培养步骤：萌发的玫瑰石斛种子继续培养，玫瑰石斛种苗长到2-3cm高时称之为一级母瓶，此时将一级母瓶在无菌操作台上转到第二1/2MS培养基中，长至5-6cm时称为二级母瓶；

生根培养步骤：将二级母瓶转至MS培养基中，生根培养得到生根瓶苗；

炼苗、驯化移栽步骤：将生根瓶苗培养85-95天，再将其移到避免强光直射的室外环境中，放置15-30天，再打开培养瓶的瓶盖放置3-5天后，用多菌灵稀释液浸泡玫瑰石斛苗根部，洗净阴干水分，将其移栽到基质中驯化。

2.如权利要求1所述的玫瑰石斛组织培养扩繁的方法，其特征在于：外植体选择步骤中，选择玫瑰石斛2-4年的母本植株，在玫瑰石斛开花期间对其人工授粉，让其长出果荚，继续培育3-4个月，待果荚成熟后，将其采摘放置在3-7℃的环境下保存1-3周。

3.如权利要求1所述的玫瑰石斛组织培养扩繁的方法，其特征在于：外植体消毒步骤中，洁净果荚的具体步骤为，先将果荚用洗洁精水浸泡15-20min，用毛刷刷净种壳表面，并用自来水冲洗10-15min，然后将果荚用浓度75％医用酒精浸泡30-60s，无菌水冲洗3-4次，再进行消毒；用浓度为1-3％的次氯酸钠进行一次消毒，用浓度为0.1-0.3％的氯化汞进行二次消毒。

4.如权利要求1所述的玫瑰石斛组织培养扩繁的方法，其特征在于：播种步骤中，第一1/2MS培养基的成分包括1890-1900mg/L硝酸钾，1640-1650mg/L硝酸铵，440-445mg/L二水氯化钙，370-375mg/L七水硫酸镁，160-170mg/L磷酸二氢钾，0.8-0.83mg/L碘化钾，6.0-6.2mg/L硼酸，22.3-23.0mg/L四水硫酸锰，8.6-9.0mg/L七水硫酸锌，0.2-0.25mg/L钼酸钠，0.025-0.028mg/L五水硫酸铜，0.028-0.03mg/L氯化钴，27.5-29mg/L硫酸亚铁，23-25mg/L乙二胺四乙酸，96-100mg/L肌醇，0.2-0.3mg/L烟酸，0.25-0.35mg/L盐酸硫胺素，0.2-0.3mg/L盐酸吡哆锌，0.8-0.9mg/L甘氨酸，浓度为2％-3％的蔗糖和4.8-6.0g/L琼脂粉，pH调至5.8-6.2。

5.如权利要求1所述的玫瑰石斛组织培养扩繁的方法，其特征在于：播种步骤中，培养25-30天至种子萌发，培养的条件为，温度为24℃-26℃，光照强度为2000-2500lx，光照时间为10-12小时/天。

6.如权利要求1所述的玫瑰石斛组织培养扩繁的方法，其特征在于：继代培养具体为，萌发的玫瑰石斛种子置于光照强度为2000-2500lx的培养室中继续培养40-50天，光照时间为10-12小时/天，玫瑰石斛种苗长到2-3cm高时称之为一级母瓶，此时将一级母瓶在无菌操作台上转到第二1/2MS培养基中，培养55-65天，长至5-6cm时称为二级母瓶。