[发明专利]一种人源单链抗体及其应用

说明书

本发明属于抗体药物领域公开了利用噬菌体抗体库技术筛选并利用基因工程方法制备的人源单链抗体即抗PHD2的人源单链抗体INP及抗PHD2的人源胞内单链抗体ER‑INP，并公开了编码所述人源单链抗体的多核苷酸、包含所述多核苷酸的载体及用途。本发明所述人源单链抗体INP及ER‑INP是一种低毒、高效、特异的抑制PHD2羟化活性的活性分子，避免了异源抗体用于人体的毒副作用。同时该人源单链抗体是小分子的单链抗体，具有分子量小、免疫原性低等优点。另外，引入内质网定位信号使人源胞内单链抗体ER‑INP在细胞内高效、稳定的抑制PHD2的羟化活性，可有效提高HIF的蛋白水平，促进血管生成和肝等组织损伤修复，对组织损伤起保护作用。

技术领域

本发明属于抗体药物领域，具体涉及一种人源单链抗体及其应用。

背景技术

氧气的动态平衡在机体的生理和发育过程中扮演着重要角色，随着环境中氧气浓度的变化，机体也会做出应答来适应缺氧。在缺氧条件下，缺氧诱导因子(hypoxia-inducible factors，HIFs)作为缺氧应激最主要的因子，能够驱动一系列基因的转录，促进缺氧适应性反应。HIF-1最初是在1992年由Semenza G L等对经缺氧处理的Hep3B和HepG2细胞株的核提取物进行凝胶迁移分析时被发现的，而且实验表明HIF-1介导了缺氧诱导的促红细胞生成素(EPO)基因的转录。HIF-1是急性低氧应激最敏感的因子，也是机体缺氧应答的主要转录因子，目前的研究表明其下游靶基因有1000多种，这些基因大部分在急性或慢性缺氧适应性反应中都有重要作用，如调节红细胞和新血管的生成，调节细胞的代谢，调节细胞的生存力、增殖和凋亡等。在急性肝损伤中，HIF-1的上调是促进血管生成和组织损伤修复的关键。1995年Wang G.L.(J.Biol.Chem,1995,270(3):1230-1237)提出HIF是一种异二聚体，它是由HIF-α和HIF-β两个亚基组成的，其稳定性取决于HIF-1α亚基。1999年Maxwell,P.H.(Nature(London)1999,399：271–275)提出肿瘤抑制蛋白pVHL(product ofvon Hippe-llindau)靶向HIF-α的氧依赖蛋白水解过程，是调节HIF-α稳定性的关键物质。2001年Ivan,M.(Science 292,2001 464–468)提出在常氧状态下，脯氨酸羟化酶(PHD)能够羟化HIF-α的两个脯氨酸残基，被羟基化的HIF-α与VHL结合，招募E3泛素连接酶，通过泛素介导的蛋白酶体降解途径促进HIF-α的降解。2006年Tian YM(Biochem J,2006,397(1):1792186.)提出常氧状态下HIF-α通过pVHL介导的泛素-蛋白酶体途径降解，HIF-α的特定脯氨酰残基(H IF-1α的Pro-402和Pro-564)羟基化是pVHL与其结合的必要条件，二者的结合启动了HIF-α的降解过程。由此可见，HIF-α脯氨酰残基的羟基化是HIF降解的关键，而脯氨酸羟化酶(PHD)便是该催化反应的限速酶。