[发明专利]一种磷酸化蛋白质富集修饰的方法和试剂盒

权利要求书

1.一种磷酸化修饰蛋白质的富集方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、通过蛋白水解酶水解磷酸化蛋白质，得到溶于缓冲液中的磷酸化多肽溶液；

S2、在磷酸化多肽溶液中加入磁性纳米材料，初次富集磷酸化蛋白质，得混合溶液；

所述磁性纳米材料为通过3-氨丙基三乙基硅烷修饰的Fe₃O₄/APTES纳米复合颗粒，所述Fe₃O₄/APTES纳米复合颗粒是以FeCl₃和FeSO₄为原料制备的磁性溶液与3-氨丙基三乙基硅烷搅拌制得；所述磁性溶液为50mL，固体含量8mg/mL，所述3-氨丙基三乙基硅烷为分析纯，用量为0.2～0.4mL；

S3、在步骤S2所得混合溶液中外加磁场，使磁性纳米材料与溶液分离，得初次上层清液和初次下层固体；

S4、收集初次下层固体，用Tris缓冲液清洗初次下层固体且外加磁场，分离得到二次上层清液和二次下层固体收集备用；

S5、将初次上层清液和二次上层清液混匀，加入纳米TiO₂进行二次富集，分离得三次下层固体和三次上层清液；

S6、分别对二次下层固体和三次下层固体分别进行质谱分析。

2.根据权利要求1所述的磷酸化修饰蛋白质的富集方法，其特征在于，所述步骤S1的磷酸化多肽溶液的浓度为10ng/μL～50ng/μL，溶于25mmol/L的Tris缓冲液中。

3.根据权利要求1所述的磷酸化修饰蛋白质的富集方法，其特征在于，所述步骤S5的纳米TiO₂是以钛酸四丁酯为原料，采用水解法制备得到。

4.根据权利要求1所述的磷酸化修饰蛋白质的富集方法，其特征在于，步骤S2中磁性纳米材料富集的温度为30～40℃，富集时间为6～8min；步骤S5的二次富集温度为32～42℃，富集时间为2～2.5min。