[发明专利]一种模拟生态环境覆土培育蚕虫草的方法

权利要求书

1.一种模拟生态环境覆土培育蚕虫草的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1) 菌种宿主选择：选择五龄4~6d家蚕原种或一代杂交种健康蚕体，5龄饷食后，在温度23-27℃，相对湿度70-80%环境条件下，连续给叶饲养，及时除沙，选择健壮的家蚕幼虫备用；

(2) 扩大培养菌种液体制备液：选择于蚕蛹上生长优良的蛹虫草菌母种平板培养基上活化后，菌种均匀分割，接种于添加5~8wt%蚕蛹粉的液体培养基中，在黑暗条件、温度18-22℃下静置培养2d，第3天开始振荡培养，每天振荡3~5h、130~140r/min，第5天在180-220lx光照强度下培养1d，用3-4层无菌纱布过滤除去菌丝，获得菌种液体制备液；

所述蛹虫草菌母种为北冬虫夏草，活化后经过新鲜蚕蛹复壮优选后分离，纯化、保存后备用；

(3) 接种前后处理：选择健壮洁净的家蚕幼虫，每头注射0.35-0.45ml的步骤（2）所得菌种液体制备液，注射完成后将蚕体放在高温紫外处理的吸水纸上，吹风，然后将干爽洁净的家蚕从吸水纸上收起，放入纱网木框中，用纱网盖住，温度21~24℃，相对湿度60~70%通风条件下培养4~6d，待95%以上蚕体被感染僵化后收集整理感染僵化尚未发菌的蚕体，剔除因注射创伤引起杂菌感染、变黑软化或未感染僵化的蚕体；

(4) 填埋基质准备：准备带盖透明塑料盒；选用草木灰，100℃以上高温灭菌8~10小时后再紫外灭菌3~4小时，置于带盖透明塑料盒中，草木灰厚4~6cm，作为模拟生态土层填埋基质用；

(5) 覆土培育管理：将步骤（3）感染僵化尚未发菌的蚕体填埋于装有草木灰填埋基质的带盖透明塑料盒中，仅蚕头胸部3～5mm露出，每天打开盒盖喷洒无菌水，放置在温度15℃~22℃、相对湿度60%~70%的黑暗环境下培养3~7天；再转入光强为250~300lx，温度为白天21~24℃、夜晚16~18℃,相对湿度70~75%的条件下培养4-6天；再转入光强为50~500lx，温度为14℃~25℃,相对湿度60%~80%的条件下培养35~45天；子实体生长成熟后，将蚕体从草木灰填埋基质中取出，清理干净周围粘覆的草木灰，即获得成熟蚕虫草。

2.根据权利要求1所述的模拟生态环境覆土培育蚕虫草的方法，其特征在于，步骤（2）中，蚕蛹粉为蚕蛹体变硬、体色黄褐未羽化前的蛹体，60-70℃烘干粉碎，过100目筛所得。

3.根据权利要求1或2所述的模拟生态环境覆土培育蚕虫草的方法，其特征在于，步骤(3)中，注射时缓慢平稳推进。

4.根据权利要求1或2所述的模拟生态环境覆土培育蚕虫草的方法，其特征在于，步骤(3)中，将接种蚕放在纱网木框中培养，纱网上方放置新鲜桑叶。

5.根据权利要求1或2所述的模拟生态环境覆土培育蚕虫草的方法，其特征在于，步骤(4)中，草木灰为水稻谷壳燃烧处理所得的黑灰。

6. 根据权利要求1或2所述的模拟生态环境覆土培育蚕虫草的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述添加5~8wt%蚕蛹粉的液体培养基为普通常用的液体培养基中添加蚕蛹粉，其重量配比为：马铃薯 25%、葡萄糖 2%、蛋白胨 0.2%、酵母浸膏0.1%、蚕蛹粉5~8wt%、KH2PO40.1%、MgSO4 0.05%、VB1 0.01%、水1000 mL、pH 6.5~7；将液体培养基放入121℃高压灭菌锅中灭菌30 min以上，冷却备用。