[发明专利]一种乌参多糖的制备方法

权利要求书

1.一种乌参多糖的制备方法，其特征在于所述的制备方法包括如下步骤：

a）剥掉外皮的东海乌参，剪碎后经2倍体积丙酮反复脱脂至少2次，将脱脂完全后的乌参置于干燥箱中40-50℃烘干；

b）取干燥后的鱼鳔经粉碎机粉碎过100目筛后置于烧杯中，并加入20倍体积的1M KOH溶液，碱解1.5-2.5h；

c）然后，先用冰醋酸调节pH至4-5后加入4%胃蛋白酶，35-40℃下提取1.5-2.5h后再用0.1M NaOH调节pH至7.8-8.2后加入4%胰蛋白酶，35-40℃下提取1.5-2.5h，最后用冰醋酸调回至中性，再升温至75-85℃提取，0.5-1.5h将酶灭活；

d）将得到的水提物于7500-8500 r/min高速离心机离心15-25min后留上清液；残渣按上述提取方法再重复提取一次；

e）合并两次所得上清液，经45-55℃旋转蒸发仪浓缩至原体积的1/10，加入4倍体积无水乙醇醇沉过夜,然后醇沉物再经过Sevege法反复脱除蛋白，经透析袋流水透析68-75h后，冷冻干燥即得淡黄色粉末状乌参粗多糖。

2.根据权利要求1所述的乌参多糖的制备方法，其特征在于所述的制备方法包括如下步骤：

a）剥掉外皮的东海乌参，剪碎后经2倍体积丙酮反复脱脂3次，将脱脂完全后的乌参置于干燥箱中45℃烘干；

b）取干燥后的鱼鳔30 g经粉碎机粉碎过100目筛后置于烧杯中，并加入20倍体积的1MKOH溶液，碱解2h；

c）然后，先用冰醋酸调节pH至4.5后加入4%胃蛋白酶，37℃下提取2h后再用0.1M NaOH调节pH至8后加入4%胰蛋白酶，37℃下提取2h，最后用冰醋酸调回至中性，再升温至80℃提取1h将酶灭活；

d）将得到的水提物于8000 r/min高速离心机离心20 min后留上清液；残渣按上述提取方法再重复提取一次；

e）合并两次所得上清液，经50℃旋转蒸发仪浓缩至原体积的1/10，加入4倍体积无水乙醇醇沉过夜,然后醇沉物再经过Sevege法反复脱除蛋白，经透析袋截留分子量3500 Da、流水透析72h后，冷冻干燥即得2.5g淡黄色粉末状乌参粗多糖。

3.根据权利要求1或2所述乌参多糖的制备方法，其特征在于所述乌参粗多糖通过使用Q-Sepharose Fast Flow阴离子交换色谱柱（2.6×50 cm）进行梯度洗脱，确定分段洗脱适宜的NaCl浓度分别为0和2 mol/L，两个多糖组分分别命名为W0，W2；将所得的各多糖组分透析，浓缩，冻干，W2即为所得组分。