[发明专利]Ⅰ群血清4型禽腺病毒基因工程亚单位疫苗、制备方法及其应用

说明书

本发明提供Ⅰ群血清4型禽腺病毒基因工程亚单位疫苗、制备方法及其应用，属于基因工程领域。Ⅰ群血清4型禽腺病毒基因工程亚单位疫苗，所述疫苗的抗原是序列如SEQ ID NO:2所示的多肽。本发明还提供含有序列如SEQ ID NO:2所示多肽的多联苗。本发明基因工程亚单位疫苗，针对Ⅰ群血清4型禽腺病毒感染具有较好的预防和控制效果。

技术领域

本发明属于基因工程领域，具体涉及一种Ⅰ群血清4型禽腺病毒基因工程亚单位疫苗、其制备方法及应用。

背景技术

禽腺病毒(Fowl Adenovirus，FAdV)属于腺病毒科禽腺病毒属，主要分为5个种(A-E)，12个血清型。禽腺病毒感染于1963年首次在美国发生，随后扩散至世界各地。世界各地均有报道，FAdV感染一般引起亚临床症状，而急性感染会引发肌胃糜烂、心包积液及包涵体肝炎等。近年来，我国鸡群由FAdV引起的心包积液、包涵体肝炎临床病例逐渐增多。至2015年，FAdV感染鸡群的疫情在我国多个省份暴发，而发病鸡除3-4周龄的肉鸡外，10-20周龄的蛋鸡也可被FAdV感染，而目前高致病性Ⅰ群血清4型禽腺病毒(FAdV-4)在国内鸡群流行相当广泛，给国内养鸡业造成了严重的经济损失。

迄今为止，临床上尚未出现针对FAdV-4的有效疫苗，而疫苗免疫是目前防控传染性疾病的最有效手段，最常用的是灭活疫苗和弱毒疫苗，然而灭活苗存在灭活不完全、弱毒苗存在毒力返强的潜在危险，而亚单位疫苗克服了灭活苗和弱毒苗的这些缺陷；此外，目前通过接种鸡胚、原代鸡胚肝肾细胞或鸡肝癌细胞系(LMH)来繁殖I群4型禽腺病毒以制备疫苗，然而鸡胚繁殖病毒的毒价低，病毒需要高倍浓缩，成本较高；原代肝肾细胞制备过程繁琐、易污染，且在制备过程中易混入鸡胚成纤维细胞(CEF)，不利于试验操作；鸡肝癌细胞系致瘤性较强，利用其扩增的病毒存在潜在的致瘤风险。因此急需开发安全有效的新型基因工程亚单位疫苗。但是，现有技术中缺少有效的Ⅰ群血清4型禽腺病毒基因工程亚单位疫苗。

发明内容

本发明的目的是提供一种Ⅰ群血清4型禽腺病毒基因工程亚单位疫苗，针对Ⅰ群血清4型禽腺病毒感染具有较好的预防和控制效果。

为了实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案：

Ⅰ群血清4型禽腺病毒基因工程亚单位疫苗，所述疫苗的抗原是序列如SEQ ID NO:2所示的多肽。

在本发明中，所述抗原通过如下方法制备的：采用昆虫细胞繁殖携带所述多肽编码基因的重组杆状病毒，裂解细胞，取上清液作为所述抗原。

在本发明中，携带所述多肽编码基因的重组杆状病毒采用如下方法构建：将所述多肽编码基因插入杆状病毒转移载体pFastBac^TM-1中，得到重组杆状病毒转移质粒；将所述重组杆状病毒转移质粒转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞，获得重组杆状病毒穿梭质粒；将所述重组杆状病毒穿梭质粒转染昆虫细胞，获得表达所述多肽的重组杆状病毒。

优选的技术方案中，所述多肽编码基因的序列如SEQ ID NO:1所示。

在本发明中，所述昆虫细胞为Sf9或High Five细胞。

优选的技术方案中，所述疫苗的剂型为油佐剂。

本发明还提供含有序列如SEQ ID NO:2所示多肽的多联苗。

本发明将fiber和hexon蛋白重要抗原表位基因进行基因合成并克隆进杆状病毒表达系统(Invitrogen)，融合表达F-H蛋白，获得能显著提高免疫原性并产生高效免疫保护的疫苗抗原，制备Ⅰ群血清4型禽腺病毒基因工程亚单位疫苗。该疫苗对Ⅰ群血清4型禽腺病毒具有良好的预防和控制效果，能对Ⅰ群血清4型禽腺病毒提供安全、有效的免疫保护。

附图说明

图1为Fiber基因的PCR扩增结果示意图，M：200bp DNA Ladder；1：Fiber基因片段。