[发明专利]一种检测酪氨酸的胶体金试纸

说明书

一种检测酪氨酸的胶体金试纸，包括预反应液及底板，在底板上依次设置样品垫、胶体金结合垫、层析膜、吸水材料；所述层析膜上靠近胶体金结合垫的一端设置检测线，靠近吸水材料的一端设置质控线；所述胶体金结合垫为胶体金标记酪氨酸酶抗体复合物；所述检测线由酪氨酸酶抗原包被；所述质控线由羊抗鼠多克隆抗体包被；所述预反应液为酪氨酸酶溶液。本发明对尿液中微量的酪氨酸具有特异性检测功能，检测方法简单、快速，准确率高。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，尤其是涉及一种检测酪氨酸的胶体金免疫层析试纸及其制备和检测方法。

背景技术

胶体金是一种常用的标记技术，是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术，有其独特的优点。近年已在各种生物学研究中广泛使用。在临床使用的免疫印迹技术几乎都使用其标记。同时在流式、电镜、免疫、分子生物学以至生物芯片中都可能例用到。

1971年Faulk和Taytor将胶体金引入免疫化学，此后免疫胶体金技术作为一种新的免疫学方法，在生物医学各领域得到了日益广泛的应用。目前在医学检验中的应用主要是免疫层析法(immunochromatogra-phy)和快速免疫金渗滤法(Dot-immuogoldfiltration assay DIGFA)，用于检测HBsAg、HCG和抗双链DNA抗体等，具有简单、快速、准确和无污染等优点。

胶体金是由氯金酸(HAuCl₄)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，形成带负电的疏水胶溶液，由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。

胶体金除了与蛋白质结合以外，还可以与许多其它生物大分子结合，如SPA、PHA、ConA等。根据胶体金的一些物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性，因而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。

胶体金标记，实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。吸附机理可能是胶体金颗粒表面负电荷，与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固结合。用还原法可以方便地从氯金酸制备各种不同粒径、也就是不同颜色的胶体金颗粒。这种球形的粒子对蛋白质有很强的吸附功能，可以与葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽缀合物等非共价结合，因而在基础研究和临床实验中成为非常有用的工具。

免疫金标记技术(Immunogold labelling techique)主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑褐色颗粒，当这些标记物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定性或半定量的快速免疫检测方法中，这一反应也可以通过银颗粒的沉积被放大，称之为免疫金银染色。

对羟基苯丙氨酸(即酪氨酸)作为肿瘤标志物，已经被众多学者所认知，例如CN102004103、快速尿液单羟酚代谢物检测在恶性肿瘤中的诊断价值(检验医学与临床，2016第6期，李兴翠等)、尿液对羟基苯丙氨酸检测在恶性肿瘤早期预测中的应用价值(检验医学与临床，2015年第16期，黄学梅等)。

目前这些检测方法均为无机化学试剂检测法，无机化学检测法的优点是检测试剂制备简单。但是，尿液中的对羟基苯丙氨酸的含量是及其微量的，并且尿液中还存在多种其他多种成分会影响检测结果，因此，开发一种更为精密、特异性更高的检测方法迫在眉睫。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本申请提供了一种检测酪氨酸的胶体金试纸。本发明对尿液中微量的酪氨酸具有特异性检测功能，检测方法简单、快速，准确率高。

本发明的技术方案如下：