[发明专利]一种基于荧光微球标记的微囊藻毒素免疫定量试纸条

说明书

本发明公开了一种基于荧光微球标记的微囊藻毒素免疫定量试纸条，属于免疫分析快速检测技术领域。本发明通过标记荧光微球制备荧光探针，包括荧光微球‑微囊藻毒素人工抗原和荧光微球‑羊抗兔二抗。将羊抗鼠二抗和兔IgG抗体分别喷涂于硝酸纤维素膜作为检测线和质控线制得免疫层析试纸条；利用竞争免疫法，通过读取荧光免疫分析仪上检测线的荧光值，对样品中微囊藻毒素进行定量分析。该方法不但克服了试纸条技术中胶体金不易保存的缺点，而且制备荧光探针的方法简单高效。

技术领域

本发明涉及一种基于荧光微球标记的微囊藻毒素免疫定量试纸条，属于免疫分析快速检测技术领域。

背景技术

微囊藻毒素(Microcystin，MC)是一类具有生物活性的七肽单环化合物，是具有强烈促癌作用的肝毒素。其主要由淡水藻类铜绿微囊藻(Microcystisaeruginosa)产生，具有相当的稳定性。目前为止，已发现80种不同的微囊藻毒素亚型，其中以可变氨基酸为亮氨酸(L)和精氨酸(R)的微囊藻毒素-LR(Microcysitn-LR,MC-LR)的毒性最强，目前已知毒性仅次于二恶英。饮用水中低剂量的该毒素就可以引起人的肝脏损伤，促进肝癌的发生，给人类的健康带来巨大的威胁与隐患。

目前，检测水体中微囊藻毒素的方法主要分为三种：生物测定法、化学分析法、免疫分析法。生物测定法是最早采用的一类毒性分析法，利用动物体内实验、细胞毒性实验等来观测藻毒素毒性，其具有操作简单，可获取器官的病理资料等优点，但存在工作量大、毒素消耗量大、专一性和灵敏度差、无法进行定量分析等缺点。化学分析法是利用光电技术以及样品的理化性质进行分离纯化和定性定量分析的一种方法。其中高效液相色谱法(HPLC)因其测量准确灵敏、重现性好、能同时分析出不同的藻毒素异构体而应用广泛，但存在需要高纯度的标准品、待测样品需要预处理、仪器价格昂贵、需要专业操作等不足之处。

免疫分析法利用毒素诱发免疫反应产生抗体，抗体和抗原进行特异性结合来进行毒素检测。由于其简便快捷、方便携带以及成本低的特性，具有良好的发展趋势。市场上已有胶体金免疫层析试纸条，是以硝酸纤维素膜为固相载体，将胶体金与待测物的抗体/抗原相结合作为标记物，通过毛细管作用使待测样品以及标记物在层析试纸条上移动，经过硝酸纤维素膜时，与提前喷涂的抗原/抗体以及二抗发生免疫反应，最后通过检测线和质控线处颜色的深浅来判断测试结果。该检测技术操作方便、样品无需预处理、特异性好，但其应用的是单份试剂，难以进行质量控制，且灵敏度不高，动态检测范围窄，只能用于定性分析。

我国微囊藻毒素污染范围广，常用检测方法无法满足要求，亟需研究出更加灵敏、方便的可用于现场快速、高通量检测的方法。

发明内容

针对现有技术存在的上述不足，本发明提供了一种基于荧光微球标记的快速检测微囊藻毒素的免疫定量试纸条。本发明采用了荧光微球替代胶体金，制备荧光微球标记的微囊藻毒素人工抗原，将其作为荧光探针用于免疫层析检测微囊藻毒素，结果表明该方法可以快速定量检测微囊藻毒素。

本发明提供的基于荧光微球标记的微囊藻毒素免疫定量试纸条，是在硝酸纤维素膜(NC膜)上分别喷涂羊抗鼠二抗和兔IgG抗体，分别作为检测线(T线)和质控线(C线)，两线之间相距0.4-0.8cm，干燥后，贴上吸水纸和样品垫，以0.3-2cm左右的宽度切条。

在本发明的一种实施方式中，羊抗鼠二抗的浓度为0.5-2mg/mL，喷涂量为1-3μL/cm。

在本发明的一种实施方式中，兔IgG抗体的浓度为0.5-2mg/mL，喷涂量为1-3μL/cm。

在本发明的一种实施方式中，所述吸水纸、硝酸纤维素膜以及样品垫依次相邻，且相邻部位部分重叠区域的长度为1～5mm。

在本发明的一种实施方式中，所述吸水纸与硝酸纤维素膜重叠的部分位于硝酸纤维素膜的上侧。