[发明专利]小鼠抗人Thyroglobulin单克隆抗体及分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株

说明书

一种小鼠抗人Thyroglobulin单克隆抗体及分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株。所述的分泌Thyroglobulin单克隆抗体的杂交瘤细胞株克隆号为TGS130，保藏编号为：CGMCC No.12692。本发明还提供了所述杂交瘤细胞株TGS130产生的单克隆抗体。该抗体包括重链可变区和轻链可变区，重链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO:7，轻链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO:8。该抗体可用于科研或临床免疫组化检测Thyroglobulin表达。

技术领域

本发明涉及以天然Thyroglobulin蛋白免疫小鼠获得的分泌Thyroglobulin单克隆抗体的杂交瘤细胞株TSG130，属于生物工程技术领域。

背景技术

甲状腺球蛋白（Thyroglobulin）属于糖蛋白，来源于功能性甲状腺组织，占全部甲状腺蛋白的75%，是甲状腺滤泡上皮细胞分泌的大分子糖蛋自，由两个相同的单体肽链组成，分子量为660kDa。促甲状腺激素（TSH）、甲状腺体内碘缺乏和甲状腺刺激性免疫球蛋白等因素可刺激其产生。正常情况下其受TSH调节，在甲状腺细胞内循环，在蛋白水解酶的作用下，仅极少部分Thyroglobulin经甲状腺淋巴管分泌入血。

甲状腺癌是常见的内分泌系统肿瘤，约占全身恶性肿瘤的 1.3%~1.5%，发病率逐年增加 ， 其中分化型甲状腺癌（DTC）主要包括甲状腺乳头状癌和滤泡状癌，占总体发病率的 90% 以上。DTC的恶性程度较低，预后良好，10年生存率超过90%，但部分患者存在复发转移现象，其中 T分期、治疗方式以及临床病理分期为影响 DTC 预后的独立因素。

甲状腺球蛋白被认为是甲状腺体形完整性的特殊标志物，也是分化型甲状腺癌（DTC）的肿瘤标志物，可作为分化型甲状腺癌患者治疗后随访的重要参考指标。也可用于鉴别亚急性甲状腺炎和假的甲状腺毒症。

随着甲状腺球蛋白（Thyroglobulin）相关研究的深入，获得活性高的Thyroglobulin单克隆抗体对于临床诊断和科学研究具有重要意义。该抗体具有较高的组织特异性，主要用于各种类型的原发性和转移性甲状腺上皮癌的研究。

发明内容

本发明的目的是提供一种高亲和性的、可用于科研或临床免疫组化检测甲状腺球蛋白（Thyroglobulin）表达的小鼠抗人Thyroglobulin单克隆抗体及分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：

（1）以纯化的天然Thyroglobulin蛋白作为抗原。

（2）采用经典的细胞融合技术制备Thyroglobulin单克隆抗体。亲和层析纯化抗体蛋白，SDS-PAGE测定抗体纯度，直接ELISA 法测定纯化抗体的滴度。

（3）通过免疫组织化学分析Thyroglobulin单克隆抗体染色人甲状腺癌石蜡切片。

（4）根据抗体基因的恒定区序列合成特异性引物，PCR扩增单克隆抗体Thyroglobulin重链可变区和轻链可变区，回收目的片段，克隆到pGEM-T载体中，转化大肠杆菌TGl细胞后筛选阳性克隆，抽提质粒后测序确定了单克隆抗体Thyroglobulin的重链和轻链可变区序列。

本发明提供的以纯化的天然Thyroglobulin蛋白为抗原免疫小鼠获得的分泌Thyroglobulin单克隆抗体的杂交瘤细胞株，名称为TSG130，分类命名为小鼠抗人Thyroglobulin杂交瘤细胞系，该细胞株TSG130已于2016年07月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所），保藏编号为CGMCC No.12692。