[发明专利]一种多肽及其制备方法与应用

说明书

本发明属于生物制药领域，具体涉及一种多肽及其制备方法与应用。本发明所述多肽其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明所述多肽使用多肽合成仪，采用固相合成法合成。实验结果表明本发明所述多肽具有很好的抗氧化和抑制β‑淀粉样蛋白聚集作用，同时应用于H₂O₂诱导产生超氧化物的神经细胞进行抗氧化作用，效果良好，可以用于制备抗氧化和抑制β‑淀粉样蛋白聚集的药物以及治疗神经系统疾病的药物，应用范围广泛，具有良好的经济和社会效应。

技术领域

本发明属于生物制药领域，具体涉及一种多肽及其制备方法与应用，尤其是一种同时具有抗氧化和抑制β-淀粉样蛋白聚集作用的多肽及其制备方法与应用。

背景技术

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种伴有认知、行为和功能失常的进行性神经疾病，是老年痴呆最常见的一种形式。它的病理特征是：大脑皮质弥漫萎缩，沟回增宽，脑室扩大，神经元大量减少，形成可见的老年斑(Senile Plaques,SP)、神经纤维缠结(Neurofibrillary tangles,NFT)等脑内病变。在大脑皮层和海马中，大量出现老年斑和神经纤维缠结，是诊断AD的两个主要依据。SP主要是由β-淀粉样蛋白(Amyloidβ,Aβ)的沉积形成，而NFT的主要成分为异常磷酸化的tau蛋白。迄今为止，还没有哪一种药物能够完全控制甚至治愈AD患者，绝大部分药物只能尽量维持现状和延缓病情发展，然而它们往往存在药效缓慢、副作用强、危险性大的缺陷，更不用说对AD中晚期患者治疗能起到显著效果。因此，对AD治疗或预防药物的研究和开发仍需要投入大量的精力和努力。目前，散发性AD的病因和发病机制仍未能彻底阐明，但同时存在与AD相关的几种假说，包括淀粉样肽级联假说、氧化应激与自由基损伤假说、乙酰胆碱能异常假说和Tau蛋白磷酸化假说。近年来在AD治疗方面，以Aβ为治疗靶点的药物和开发是该领域研究热点。它存在病理机制清楚、支持Aβ假说的证据较多以及针对Aβ治疗的方式明确等优点。

作为AD患者脑中老年斑块的主要成分，Aβ是由一种具有折叠构型，约39-43个氨基酸组成的多肽，其分子质量约为4.2kDa。它是由前体蛋白APP经β或者γ分泌酶作用产生的。在人体内，Aβ40和Aβ42是最为常见的两种Aβ亚型，其中Aβ42具有更强的毒性，而且更容易产生聚集，形成Aβ聚集沉淀的核心，并引发神经毒素作用。在AD发展早期，Aβ就已被发现在大脑中沉积，而Aβ的异常聚集和沉淀会对神经细胞产生毒性，这种毒性能使大脑皮层内发生复杂的级联变化，甚至会引起神经细胞的凋亡，导致的最终结果是产生AD病症。在正常生理条件下，Aβ的产生和降解是处于动态平衡的，然而在基因突变或者降解Aβ的酶功能出现紊乱的条件下，Aβ产生和清除之间的动态平衡就会被打破，由此会引发Aβ异常聚集沉淀，进而发生纤维化，甚至引发包括Tau蛋白过度磷酸化等一连串的复杂反应，如突触变化、神经递质丢失、炎症反应等。此外，Aβ能明显加剧神经元和脑组织的脂质、核酸以及蛋白质的过氧化水平，诱导大量的过氧化物和自由基的生成，从而导致神经细胞的死亡。

相关的研究结果显示，Aβ聚集和形成纤维过程与自由基的产生有着非常密切的关系。在APP代谢过程中，金属离子催化的氧化作用可诱导Aβ聚集，并在此过程中产生氧自由基，而自由基又可以促进Aβ转向β折叠的构象，从而聚集形成纤维。晚期的糖基化终末产物(Advanced glycation end products,AGEs)与ROS的产生有关，而AGEs修饰的Aβ不断累积，导致可溶性纤维的Aβ聚集，同时，糖基化后的Aβ能够抵抗蛋白酶的水解作用和巨噬细胞的吞噬作用。自由基一方面促进Aβ的生成和沉积，另一方面Aβ也加入了自由基的氧化损伤过程中。Aβ诱导细胞膜上的脂质和蛋白质氧化修饰，致使活性氧种类(Reactive oxygenspecies,ROS)生成增多，并改变膜的通透性，使Ca²⁺内流增大，从而激活Ca²⁺依赖性蛋白激酶、酯酶，使胞质自由基合成增多，损伤细胞器。另外，Aβ可下调细胞周期蛋白激酶Cdk5和糖原合成激酶GSK3beta活性，影响着Tau蛋白磷酸化作用，致使自由基生成增多。