[发明专利]一种安普霉素的磁免疫化学发光检测试剂盒及其应用

说明书

本发明提供了一种安普霉素的磁免疫化学发光检测试剂盒，它包括：酶标抗原、酶标抗原稀释液、磁标抗体、磁标抗体稀释液、安普霉素系列标准品溶液、化学发光底物A液、化学发光底物B液、复溶液、洗涤液，其中酶标抗原是辣根过氧化物酶标记的安普霉素半抗原，磁标抗体是免疫磁珠标记的安普霉素单克隆抗体。本发明还公开了一种利用上述试剂盒配套化学发光检测仪检测牛奶中安普霉素残留量的方法，本方法对安普霉素检测具有较高的灵敏度、特异性和较短的检测时间。

技术领域

本发明涉及一种化学发光检测试剂盒及其检测方法，特别是检测牛奶中安普霉素残留量的磁免疫化学发光检测试剂盒，属于免疫学检测领域。

背景技术

安普霉素(Apramycin，Apra)又名暗霉素、阿泊拉霉素、阿布拉霉素，是氨基糖苷类抗生素的典型代表药物。安普霉素是美国礼来公司于1985年开发的新产品，目前我国也可生产，它是由黑暗链霉菌(Streptomyces tenebrarius)突变株发酵产生的。饲料中使用的多为安普霉素的硫酸盐(Apramycin sulphate)，其为棕褐色结晶粉末或暗淡的黄色粉末，极性强，易溶于水，微溶于乙醇。

氨基糖苷类抗生素使用不当，会对动物的肾脏及听觉产生毒副作用。因此，国内外相继规定了氨基糖苷类抗生素在动物食品中的最高残留限量。我国农业部于2002年12月14日235号公告发布的《动物性食品中兽药最高残留限量》中规定，安普霉素在猪的脂肪、肌肉中最高残留限量为0.1μg/kg。

目前，在食品和饲料中，安普霉素的检测方法主要有薄层色谱法、气相色谱法、气-质联机和高效液相色谱法，由于以上诸分析法样品前处理比较复杂，操作时需专门的技术人员、检测费用昂贵，不利于推广应用，因此亟需便携、高灵敏度的快速检测产品的出现。免疫检测方法是以抗原、抗体的特异性反应为基本原理建立起来的快速分析方法，由于抗原、抗体的结合具有高选择性和灵敏性，使得这一技术在药物残留检测领域得到广泛的应用。目前，最常用的免疫检测方法包括酶联免疫检测法和胶体金免疫层析检测法，但由于灵敏度较低，假阴性率和假阳性率较高，逐渐被灵敏度高、准确度高、检测时间短的化学发光免疫检测方法所替代。磁免疫化学发光检测试剂配套磁免疫化学发光检测仪检测动物源性产品中安普霉素的残留，实现检测过程的全自动化，减少人为操作误差，灵敏度高，准确度高，检测成本低，适用于大批量样品中安普霉素残留量的筛查。

发明内容

本发明的目的在于提供一种安普霉素检测试剂盒，采用该试剂盒进行安普霉素残留量检测时，具有较高的灵敏度、特异性和准确度。

本发明的另一个目的在于提供一种检测安普霉素的方法，采用试剂盒配套化学发光检测仪进行安普霉素残留量检测时，不仅具有较高的灵敏度、特异性和准确度，而且实现了全自动化检测，缩短检测时间，减少人为操作误差。

本发明试剂盒，它包括：酶标抗原、酶标抗原稀释液、磁标抗体、磁标抗体稀释液、安普霉素系列标准品溶液、化学发光底物A液、化学发光底物B液、复溶液、洗涤液。

所述酶标抗原是辣根过氧化物酶标记的安普霉素半抗原，所述磁标抗体是免疫磁珠标记的安普霉素单克隆抗体，所述安普霉素单克隆抗体是由安普霉素半抗原与牛血清白蛋白偶联得到的偶联物作为免疫原免疫动物制备获得；所述安普霉素半抗原是安普霉素被重铬酸吡啶氧化为醛基安普霉素后，再与己二酸1-酰肼反应得到，其分子结构式为：

所述免疫磁珠表面含有—OH、—COOH或—NH₂活性基团。

所述化学发光底物A液为含有鲁米诺和对甲苯酚的三羟甲基氨基甲烷溶液，化学发光底物B液为含有柠檬酸、无水Na₂HPO₄和CO(NH₂)₂·H₂O₂的水溶液。