[发明专利]DC的负调控因子靶向沉默与DC动员扩增的肿瘤联合疗法

说明书

本发明为DC的负调控因子靶向沉默与DC动员扩增的肿瘤联合疗法，提供了一种肿瘤的新型疗法，该方法联合DC体内的动员扩增和DC的免疫负调控因子表达的miRNA靶向沉默对肿瘤进行治疗；DC在体内的经动员扩增后，由DC纳米递送系统靶向导入miRNA于DC内，以RNA干扰技术控制DC中的免疫负调控因子的表达，可进一步强化防疫系统对肿瘤的放应能力；该疗法可作为手术、放疗或化疗在内的其他临床治疗手段的辅助治疗方法，同时，可以用于治疗实体瘤或非实体瘤；该疗法效果显著，副作用小，能有效抑制肿瘤细胞生长甚至杀死肿瘤细胞，为临床肿瘤的免疫治疗研究提供一条新途径。

技术领域

本发明涉及生物医药的技术领域，尤其涉及一种联合靶向沉默DC的负调控因子的表达与DC的体内动员扩增的肿瘤新型疗法。

背景技术

肿瘤一直是医学界亟待攻克的难题，肿瘤的发生涉及到多种分子及基因的改变，包括原癌基因突变、扩增或抑癌基因丢失、失活等因素。

肿瘤的免疫治疗是激发和增强机体以达到控制和杀灭肿瘤细胞的目的的概念，其常被作为一种辅助疗法，与手术、化疗或放疗等常规疗法联合应用。其中树突状细胞(Dendritic cell，DC)是目前所知惟一能激活初始性T细胞的专职抗原提呈细胞(Antigenpresenting cells，APC)，具有激活CD8⁺CTL和CD4⁺T辅助细胞的强大能力，其在免疫应答中居于中心地位，对机体克服肿瘤的免疫逃逸、增强机体对肿瘤的免疫清除等具有十分重要的作用。DC作为肿瘤免疫应答的中心环节，已成为当今肿瘤生物治疗领域备受关注的热点之一。在肿瘤患者体内，由于受肿瘤免疫抑制作用的影响，DC处于失能状态，难以激发机体有效的抗肿瘤免疫反应。为此，众多学者通过各种方法培养、激活和致敏DC，研制DC疫苗，使其在诱导特异性免疫应答时发挥重要作用，以达到控制肿瘤的目的。肿瘤疫苗旨在诱导细胞毒性T细胞(CTL)针对肿瘤抗原反应，以启动宿主抗瘤免疫应答。CTL的活化需要APC表面的主要组织相容性复合体(MHC)分子对抗原进行递呈。DC是最有效的APC，用它作肿瘤疫苗接种可诱导CTL反应并使一些病灶的肿瘤消退。

目前，以DC为基础的免疫治疗策略主要可分为2种：(1)体外分离并培养DC后，用肿瘤抗原修饰加工合成DC疫苗，然后重新回输给患者；(2)应用FMS样酪氨酸激酶3配体(FMS-like tyrosine kinase-3ligand，Flt3-L)在体内动员DC，刺激DC的扩增和成熟进行治疗，避免了体外提取DC的过程。Flt3-L是一种与造血调控有关的早期造血生长因子，可促进DC分化，具有在体内大量扩增小鼠及人类外周血和淋巴组织中DC的功能，并可刺激T细胞、NK细胞增殖，是一种重要的免疫网络因子。已被应用于肿瘤患者，在体内动员DC达到治疗目的，Flt3-L处理小鼠后，可明显增加体内DC的数量，促进DC的功能；且在乳腺肿瘤、前列腺肿瘤、颅内肿瘤等肿瘤的基础或临床研究中，显示了延缓肿瘤生长、扩散及诱导肿瘤特异性免疫应答作用。

多年来DC疫苗的应用研究取得了一定效果，迄今，已有超过100项有关DC疫苗应用于Ⅰ、Ⅱ期临床实验的研究报导。然而，近年来已有不少学者发现接受自体DC疫苗治疗的患者，病情有所加重，生存期缩短，出现DC功能抑制，引起机体对肿瘤抗原的免疫耐受并促进肿瘤生长，表明DC疫苗的临床应用还存在许多亟待解决的问题。研究表明应用生物免疫治疗激发或增强特异性抗肿瘤免疫应答，肿瘤细胞仍能够逃脱宿主的免疫攻击，即肿瘤免疫逃逸。