[发明专利]在细胞培养物中生产重组ADAMTS13的方法在审
| 申请号： | 201711432166.0 | 申请日： | 2011-07-08 |
| 公开（公告）号： | CN108060154A | 公开（公告）日： | 2018-05-22 |
| 发明（设计）人： | L·格里尔贝格尔;M·赖特尔;D·弗莱尚德尔;G·布兰贝格尔 | 申请（专利权）人： | 百深有限责任公司;百深公司 |
| 主分类号： | C12N9/64 | 分类号： | C12N9/64;C07K14/755;C12P21/02;A61K38/36;A61K38/37;A61P7/04 |
| 代理公司： | 上海华诚知识产权代理有限公司 31300 | 代理人： | 汤国华 |
| 地址： | 瑞士奥*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 细胞培养 生产 重组 adamts13 方法 | ||
1.一种用于生产重组ADAMTS13(rA13)组合物的方法，所述方法包括下述步骤：
(a)提供基础细胞培养基；
(b)给所述基础细胞培养基补充铜，以提供至少1.0μg/L的最终铜浓度；
(c)提供一个或多个细胞，所述一个或多个细胞包含编码rA13蛋白的核酸；
(d)在补充了铜的细胞培养基中培养所述一个或多个细胞，使得所述细胞表达rA13并将其分泌进培养物上清液中；和
(e)回收所述培养物上清液的至少一部分，
其中在所述回收的培养物上清液中存在每天每升经补充的基础细胞培养基至少1500单位FRETS-VWF73活性。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述基础细胞培养基是不含动物蛋白的培养基。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述基础细胞培养基是不含蛋白的培养基。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述基础细胞培养基是化学成分确定的培养基。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述经补充的基础细胞培养基的最终铜浓度是至少1μg/L铜。
6.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述经补充的基础细胞培养基的最终铜浓度是至少2μg/L铜。
7.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述经补充的基础细胞培养基的最终铜浓度是至少4μg/L铜。
8.根据权利要求5所述的方法，其中所述经补充的基础细胞培养基的最终铜浓度是1μg/L至6μg/L铜。
9.根据权利要求5所述的方法，其中所述经补充的基础细胞培养基的最终铜浓度是2μg/L至4μg/L铜。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中补充所述基础细胞培养基的铜以铜盐、铜螯合物或它们的组合的形式提供。
11.根据权利要求10所述的组合物，其中所述铜盐选自：硫酸铜、醋酸铜、碳酸铜、氯化铜、氢氧化铜、硝酸铜和氧化铜。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述一个或多个细胞是哺乳动物细胞。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述哺乳动物细胞是CHO细胞。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，其中培养所述一个或多个细胞包括：所述细胞的分批培养。
15.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，其中培养所述一个或多个细胞包括：所述细胞的连续培养。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述细胞的连续培养以恒化模式进行。
17.根据权利要求15所述的方法，其中所述细胞的连续培养以灌注模式进行。
18.根据权利要求1-17中任一项所述的方法，其中在至少100L所述经补充的基础细胞培养基中培养所述一个或多个细胞。
19.根据权利要求1-18中任一项所述的方法，其中在培养所述一个或多个细胞的步骤过程中，将细胞密度维持在小于4.0x10
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