[发明专利]一种茯苓多糖分子量与分子量分布的检测方法

说明书

本发明提供了一种茯苓多糖分子量与分子量分布的检测方法，步骤包括：S1、预处理：将茯苓多糖用氢氧化钠溶液溶胀，搅拌后采用流动相稀释，静置20～40分钟后摇匀、过滤，滤液作为供试品溶液；S2、标准曲线绘制：选取多个重均分子量不同的葡聚糖标准品，分别用流动相稀释，注入液相色谱仪进行液相色谱分析，记录色谱图，绘制标准曲线；S3、供试品溶液测定：取供试品溶液注入液相色谱仪进行液相色谱分析，记录色谱图，利用标准曲线法得到茯苓多糖散的分子量与分子量分布。该方法准确，简单，灵敏度高，分离度好，重复性好。

技术领域

本发明涉及多糖分子量检测技术领域，具体涉及一种茯苓多糖分子量与分子量分布的检测方法。

背景技术

多糖又称多聚糖，是一类由醛糖或酮糖通过糖苷键连接而成的天然高分子多聚物，由单糖聚合成聚合度大于10的极性大分子，分子量为数万至数百万，是生物体内普遍存在的、参与高等动、植物细胞膜和微生物细胞壁构成的天然高分子化合物，是构成生命活动的四大基本物质之一，具有重要的生物活性。

茯苓Poria cocos(Schw.)Wolf是多孔菌科真菌类的干燥菌核，为传统中药，茯苓多糖散为免疫调节药物，其既能增强细胞免疫功能，又能增强体液免疫功能，并能明显诱导促生IL-2、TNF、IL-6、IFN-γ等免疫因子，起到调节免疫功能的作用，在兽医临床上有广泛的应用前景。

然而在开发茯苓多糖散的过程中，茯苓多糖分子量与分子量分布并没有现成的检测和分析方法，这种现状使得该药物没有统一的标准，极大的阻碍了该药物的应用和推广，因此，建立一套有效、稳定的分子量与分子量分布检测方法时十分必要的。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种茯苓多糖分子量与分子量分布的检测方法。

本发明提供了一种茯苓多糖分子量与分子量分布的检测方法，步骤包括：

S1、预处理：将茯苓多糖用氢氧化钠溶液溶胀，搅拌后采用流动相稀释，静置20～40分钟后摇匀、过滤，滤液作为供试品溶液；

S2、标准曲线绘制：选取多个重均分子量不同的葡聚糖标准品，分别用流动相稀释至标准品溶液浓度与供试品溶液浓度相等，然后取各标准品溶液，注入液相色谱仪进行液相色谱分析，记录色谱图，绘制标准曲线；

其中，所述液相色谱分析条件为：

流动相：0.1mol/L磷酸氢二钠水溶液；

流速：流速0.60-1.20ml/min；

柱温：25-40℃；

检测器温度35℃；

S3、供试品溶液测定：取S1所得供试品溶液，注入液相色谱仪进行液相色谱分析，记录色谱图，通过S2所得标准曲线，利用标准曲线法得到茯苓多糖散的分子量与分子量分布。

本发明的有益效果是：本方法通过液相色谱进行分析检测，对照品标准曲线法进行定性定量，采用GPC专用软件处理，计算，所述检测方法精密度高(RSD值为1.54％)、准确、简单、重复性好、灵敏度高。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为实施例一中葡聚糖分子量对照品标准曲线图。

图2为实施例一中茯苓多糖散液相色谱图。

图3为实施例一中茯苓多糖GPC图。

图4为实施例一中茯苓多糖分子量分布图。