[发明专利]一种生产土霉素的培养基及发酵方法

说明书

本发明公开了一种生产土霉素的培养基及发酵方法，所述的发酵培养基的组成为：麦秸秆浆液5‑10份、糊精3‑6份、氢化植物油5‑7份、豆粉1‑4份、尿素3‑6份、十二烷基硫酸钠0.5‑0.9份、碘化钾0.3‑0.7份、葡萄糖酸钙1.5‑3.5份、葡萄糖酸锌0.5‑1份、水100份；选用地中海链丝菌为菌种，微波辐照后的改性菌种经发酵后得到效价为41000u/mL的土霉素发酵液，与传统的发酵6‑8天相比，不仅大大缩短了发酵时间，而且土霉素发酵液的效价也比传统发酵后的效价高出近20％，提高了生产效率。

技术领域

本发明属于生物制药技术领域，具体涉及一种生产土霉素的培养基及发酵方法。

背景技术

土霉素具有广谱抗病原微生物作用，为快速抑菌剂，高浓度时对某些细菌呈杀菌作用。其作用机制在于药物能特异性地与核糖体30S亚基的A位置结合，阻止氨基酰-tRNA在该位置上的联结，从而抑制肽链的增长和影响细菌或其他病原微生物的蛋白质合成。土霉素对金黄色葡萄球菌、肺炎球菌、化脓性链球菌、淋球菌、脑膜炎球菌、大肠杆菌、产气杆菌、志贺菌属、耶尔森菌、单核细胞李斯特菌等有较强抗菌活性；此外，土霉素对立克次体、支原体、衣原体、放线菌等也有较强作用，土霉素的结构如式(1)：

土霉素属传统的发酵产品，是采用龟裂链霉菌在发酵过程中的次级代谢产物。目前所采用的土霉素生产工艺发酵时间长，所生产出来的土霉素收率低，通过721分光光度计进行质量检测，在490nm光波下，普遍能够检测出大量杂质，严重影响后续制剂的质量和临床疗效。

发明内容

本发明的目的在于提供一种生产土霉素的培养基及发酵方法，改进了传统的土霉素发酵方法，优选了改进了菌种，大大提高了效价，缩短了发酵周期。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

一种生产土霉素的培养基，包括改性培养基和发酵培养基，其中：

所述的改性培养基的组成为：麦秸秆浆液2-5份、琼脂2-5份、黑芝麻粉2-4份、氢化植物油5-7份、玉米浆1-3份、薏仁粉1-3份、尿素3-6份、十二烷基硫酸钠0.5-0.9份、碘化钾0.3-0.7份、葡萄糖酸钙1.5-3.5份、葡萄糖酸锌0.5-1份、水100份；

所述的发酵培养基的组成为：麦秸秆浆液5-10份、糊精3-6份、氢化植物油5-7份、豆粉1-4份、尿素3-6份、十二烷基硫酸钠0.5-0.9份、碘化钾0.3-0.7份、葡萄糖酸钙1.5-3.5份、葡萄糖酸锌0.5-1份、水100份。

进一步，培养基的配制方法为：

a、将水烧开，30％的开水保温为热开水，另外70％的水冷却至室温得到冷开水做调节备用；

b、称取组分量的十二烷基硫酸钠、碘化钾、葡萄糖酸钙和葡萄糖酸锌这些盐类用冷开水溶解得到盐溶液；

c、称取组分量除盐类外的成分用热开水糊化得到培养浆；

d、边搅拌培养浆边加入盐溶液，混合均匀后，加入余量水搅拌均匀，高温灭菌后即得到培养基。

进一步，步骤a所述的保温的温度为85-92℃，所述的室温温度为22-26℃；步骤b所述的冷开水的用量为冷开水总量的10％-20％；步骤d所述的高温灭菌条件为在115-130℃温度下灭菌20-30min。

进一步，所述的麦秸秆浆液的相对密度为0.3-0.4，玉米浆的相对密度为1.1-3.2。

一种生产土霉素的发酵方法，具体包括以下步骤：选用地中海链丝菌为菌种，将海链丝菌接到改性培养基中，微波辐照后，转移至第一恒温室内培养即得到改性菌种，将改性菌种接到发酵培养基中，将发酵培养基放到第二恒温室中的振摇器上培养，待发酵结束即形成土霉素发酵液。