[发明专利]与HBV感染相关的基因单体型及其应用

说明书

与HBV感染相关的基因单体型及其应用属生物技术领域，发明人通过大样本IL‑22基因的启动子区单体型的深入研究。获得了与HBV感染危险度显著相关的单体型C‑T‑G(OR＝0.12)；还获得了与HBV感染后疾病进展危险度显著相关的单体型T‑C‑A(OR＝0.54)。本发明提供的IL‑22基因相关单体型的分子标记，用于检测乙型肝炎病毒感染及感染后的肝脏相关疾病进展风险，具有很高的临床应用价值。本发明为临床评定乙型肝炎病毒感染危险度及感染后的肝脏相关疾病进展危险度提供了一种可靠、灵敏的方式，且检测流程简便、成本低廉,有利于临床推广。

技术领域

本发明属生物技术领域，具体涉及乙型肝炎病毒(HBV)感染相关的IL-22基因单体型和用于构建上述单体型的SNP标记的引物对及试剂盒，以及IL-22基因单体型在检测HBV感染风险及感染后肝脏相关疾病进展风险方面的应用。

背景技术

乙肝病毒感染是人类目前最为严重的公共卫生问题之一。宿主HBV感染后免疫系统的免疫耐受主要是通过HBeAg(乙型肝炎e抗原)发生并维持的，HBeAg是以隐蔽形式存在于HBV核心，由HBcAg在体内经过代谢后丢失了一部分氨基酸并改变了空间结构，形成的具有另一种抗原活性的可溶性蛋白，它是乙肝病毒复制明显和强传染性的重要血清标志物。HBeAg阳性表明宿主的免疫耐受被打破，免疫系统会开始识别并攻击受HBV感染的肝脏细胞，造成免疫反应介导的肝脏损害。因此，HBeAg阳性患者往往有更高的HBV DNA滴度和更重的肝脏损害。HBeAg阳性患者5年内发生严重肝脏损害而后进展为肝硬化的几率为12％-20％；HBeAg阳性孕妇的子女“突破性”HBV感染的几率为9.26％，显著高于HBeAg阴性孕妇的子女(0.23％)，且新生儿接种疫苗后发生HBV感染的儿童更易罹患肝细胞癌；少数HBeAg阳性慢性肝炎病人甚至不经过肝硬化而直接进展为肝细胞癌(HCC)。因此，HBeAg阳性相对HBeAg阴性病人有更高的疾病传播及进展风险。

大量的分子生物学研究证明，HBV感染及发病与人体中细胞因子IL-22(白介素22)等众多基因相关联，细胞因子能与宿主细胞内入侵的病毒发生多种复杂的相互作用而影响病毒感染性疾病的发生、发展及预后。IL-22由激活的Th22、Thl7、γδT、和NK等细胞产生，IL-22受体复合物的限制成份IL-22R1强烈的表达于皮肤、肾脏、消化和呼吸系统器官的封闭上皮层细胞中，这些器官的上皮细胞是与外环境永久接触的躯体外部屏障。IL-22通过与受体结合后可以激活JAK/STAT信号通路，诱导STAT1、3、5等分子的磷酸化作用；IL-22可以诱导皮肤及粘膜的上皮细胞产生多种抗菌肽，对未成熟树突状细胞(dendritic cells，DCs)和CD4⁺T细胞产生趋化作用，从而在抵抗病原体入侵的天然免疫应答过程中扮演重要角色；IL-22可以减少肝脏细胞损伤、预防肝脏衰竭、改善肝脏的脂肪变性、促进肝切除后的肝细胞增殖、抑制肝细胞的凋亡，对肝脏具有保护作用；IL-22可以促进HepG2细胞增殖并抵抗由血清饥饿诱导的细胞凋亡，这源于IL-22诱导了抗凋亡(如Bcl-xL，Mcl-1)和促有丝分裂(如cyclin D1，c-myc，and Rb2)的调节，在小鼠中IL-22的暂时过表达还会保护由四氯化碳和Fas活化诱导的肝脏损伤。