[发明专利]一种从动物肝脏中提取肝素钠和蛋白肽的联产工艺

权利要求书

1.一种从动物肝脏中提取肝素钠和蛋白肽的联产工艺，其特征在于，包括以下步骤：

（1）打浆：取鲜鲜（或经冷冻保存后自然解冻）动物肝，清洗去血水，去除筋膜，用斩拌机绞碎成肉糜状，再经细磨机研磨匀浆5-10min，得到肝浆料；

（2）盐解：往肝浆料中加入其重量3-5倍的去离子水，搅拌均匀后得肝浆液，往肝浆液中加入其重量3-6%的氯化钠，缓慢升温至40℃，用NaOH调pH值至8.5-9.0，搅拌下继续升温至50-55℃，保温反应3-6小时后，快速升温至95℃，保温10min，使蛋白质高温变性，冷却至60℃，得到肝盐解液；

（3）过滤：将肝盐解液经60目滤袋过滤，分别收集滤渣（Ⅰ）和滤液（Ⅰ）；

（4）酶解：调整滤液（Ⅰ）PH值至8.0-9.0，升温至50-55℃，按每公斤肝添加6-10克蛋白酶的比例加入2709蛋白酶，保温酶解3-5小时后，升温至85℃，保温30min灭酶，冷却至60℃，用100目滤袋过滤，分别收集滤渣（Ⅱ）和滤液（Ⅱ）；

（5）吸附：将滤液（Ⅱ）经去除表面油脂层后，升温至45-60℃，按每公斤肝加入25-35g的D-254树脂，搅拌状态下保温吸附处理8-10小时后，用100目滤袋过滤，分别收集滤液（Ⅲ）和吸附有肝素钠的树脂；

（6）洗脱：

（6-1）：将收集的树脂先用水反复冲洗至水变清为止，滤干树脂，再以完全浸没树脂为量，加入质量分数为5-7%的氯化钠溶液，温度保持在45-55℃，搅拌30-60min，滤干得洗涤后的树脂；

（6-2）：以完全浸没洗涤后的树脂为量，加入质量分数为20-25%的氯化钠溶液，温度保持在45-55℃，搅拌3-4小时后，分离树脂，收集洗脱液；

（6-3）：重复步骤（6-2）一次，将两次收集的洗脱液合并，并用100目滤袋过滤，收集洗脱液待用；

（7）酸处理：往洗脱液中加入其总重量0.1-0.3%的保护剂搅拌均匀后，用稀盐酸调节PH值至3.0-3.5，静置10-15分钟，用150目滤袋过滤，分别收集滤渣（Ⅲ）和滤液（Ⅳ）待用；

(8)碱处理：用NaOH调节滤液（Ⅳ）PH值至11.0，搅拌均匀后静置15分钟，用150目滤袋过滤，分别收集滤渣（Ⅳ）和滤液（Ⅴ）待用；

（9）沉淀：将滤液（Ⅴ）用稀盐酸调节其PH值至7.0-8.0，加入其体积1.5-2.0倍的质量分数为80-85%的预冷过的乙醇，搅拌均匀后密封沉淀18-24小时，虹吸法除去上层乙醇清液，收集沉淀物（Ⅰ）待用；

（10）复沉：往上述沉淀物（Ⅰ）中加入其重量3倍的质量分数为3%的氯化钠溶液，搅拌溶解后升温至80℃，保温处理10分钟后，冷却到60℃，用150目滤袋过滤，收集滤液（Ⅵ），往滤液（Ⅵ）中加入其体积1.0-1.5倍的质量分数为85-95%的预冷过的乙醇，搅拌均匀静置30分钟，虹吸法除去上层乙醇清液，收集沉淀物（Ⅱ）待用；

（11）脱水干燥：往上述沉淀物（Ⅱ）中加入其重量2倍的质量分数为95-100%的乙醇脱水2-3次，收集沉淀物，置于60-70℃下干燥8-16小时即得肝素钠；

（12）滤渣酶解：将步骤（3）中的滤渣（Ⅰ）、步骤（4）中的滤渣（Ⅱ）、步骤（7）中的滤渣（Ⅲ）和步骤（8）中的滤渣（Ⅳ）合并，加入合并滤渣重量1-3倍的去离子水溶解并搅拌均匀，调节pH值至8.0～9.0，按每公斤滤渣加入碱性蛋白酶2.0-5.0克，加热至40-50℃，保温酶解3-5h，将酶解液升温至85℃灭酶10分钟，即得到肝蛋白酶解液；

（13）纳滤脱盐：将步骤（5）中的滤液（Ⅲ）与步骤（12）所得的肝蛋白酶解液合并，搅拌均匀后通过截留分子量为200Da的纳滤膜装置系统进行纳滤脱盐、浓缩，收集浓缩液；

（14）喷雾干燥：将上述纳滤浓缩液进行喷雾干燥，即得肝蛋白肽粉。

2.根据权利要求1所述的一种从动物肝脏中提取肝素钠和蛋白肽的联产工艺，其特征在于：步骤（7）所述的保护剂为亚硫酸氢钠。

3.根据权利要求1所述的一种从动物肝脏中提取肝素钠和蛋白肽的联产工艺，其特征在于：步骤（12）所述的碱性蛋白酶为枯草杆菌碱性蛋白酶，酶活力为200000U/ml。

4.根据权利要求1所述的一种从动物肝脏中提取肝素钠和蛋白肽的联产工艺，其特征在于：步骤（14）所述的喷雾干燥的进风口温度为200-240℃，出风口温度为80—100℃。