[发明专利]一种检测代谢素的ELISA试剂盒

说明书

本发明涉及多肽检测领域，特别涉及一种检测代谢素的ELISA试剂盒，包括抗体，抗体为由如SEQ ID NO：1所示的多肽与活化的载体蛋白偶联得到的代谢素多肽人工抗原经免疫获得的抗体中的任一个或多个。抗体是由多肽与活化的载体蛋白偶联得到的代谢素多肽人工抗原经免疫获得的抗体中的任一个或多个，其中的代谢素多肽含有半胱氨酸，制得的该人工抗原为完全抗原，经试验得到，该多肽与活化的大分子蛋白质KLH偶联形成具有免疫原性的完全抗原，能够激发小鼠体内的免疫系统产生抗代谢素单克隆抗体。本发明提供的ELISA试剂盒为成年人骨质及相关疾病的诊断和鉴别提供一种特异性血清学指标，以提高诊断的准确性。

技术领域

本发明涉及多肽检测领域，具体而言，涉及一种检测代谢素的ELISA试剂盒。

背景技术

代谢素(代谢素)是小鼠骨钙素蛋白质分子中的一段保守序列，经过序列分析此段多肽具有抗原性。骨钙素又称骨γ-羧谷氨酸包含蛋白(bonegamma-carboxyglutamic-acid-containingproteins,BGP)。该蛋白在骨矿化峰期之后才出现积聚。使用维生素K拮抗剂，可使此蛋白在骨中的含量减少，但并不影响其脯氨酸的含量，也不影响骨的机械强度。骨钙素是由成骨细胞分泌的，其含量随着年龄的变化而不同，通过血清骨钙素的含量可以了解成骨细胞的状态，对于骨质疏松的判定等具有重要的意义。

目前对于成年人骨质及相关疾病的诊断主要依靠临床表现，影像学检查以及病理现象等。目前尚缺乏特异性血清学诊断指标。酶联免疫法所采用的的是抗原一抗体的特异性免疫反应，较目前临床上所使用的诊断方法特异性较高，重复性好，试剂稳定，敏感性好，不需特殊仪器设备，目前是临床检测的一个重要方法。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测代谢素的ELISA试剂盒，为成年人骨质及相关疾病的诊断和鉴别提供一种特异性血清学指标，以提高诊断的准确性。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种检测代谢素的ELISA试剂盒，包括抗体，所述抗体为由如SEQID NO：1所示的多肽与活化的载体蛋白偶联得到的代谢素多肽人工抗原经免疫获得的抗体中的任一个或多个。

本发明提供的检测代谢素多肽含量的ELISA试剂盒，所用的抗体是由如SEQ IDNO：1所示的代谢素多肽与活化的载体蛋白偶联得到的代谢素多肽人工抗原经免疫获得，其中的代谢素多肽含有半胱氨酸，制得的该人工抗原为完全抗原，经试验得到，该多肽与活化的大分子蛋白质KLH偶联形成具有免疫原性的完全抗原，能够激发小鼠体内的免疫系统产生抗代谢素单克隆抗体。本发明提供的ELISA试剂盒为成年人骨质及相关疾病的诊断和鉴别提供一种特异性血清学指标，以提高诊断的准确性。

进一步地，所述活化的化合物为马来酰亚胺。

进一步地，所述载体蛋白为匙空血蓝蛋白。

经筛选，这三种抗体与代谢素多肽识别特异性高，灵敏性强。

进一步地，所述抗体为筛选得到的以下三种抗体中的任一种或多种：

抗体1：单克隆抗体的亚型为G2a，效价为4000；

抗体2：单克隆抗体的亚型为G2b，效价为8000，还与SEQ ID NO：2所示的多肽特异结合；

抗体3：单克隆抗体的亚型为G2a，效价为32000，还与SEQ ID NO：3所示的多肽特异结合。

这三种抗体均为单克隆抗体。

本发明中，所述的代谢素多肽人工抗原的制备方法，包括以下步骤：

如SEQ ID NO：1所示的代谢素多肽溶解，得到代谢素多肽浓度为6-9mg/ml的多肽溶液；