[发明专利]一种观察生物大分子分布的方法及应用

说明书

本发明公开了一种观察生物大分子分布的方法及应用，属于生物免疫检测技术领域。本发明观察生物大分子分布的方法，是使用改进的免疫荧光染色法使样品中不同的生物大分子分别被不同的荧光或染料标记，根据标记的不同，在显微镜下同时观察不同生物大分子的分布情况；所述改进的免疫荧光染色法为：对不同的生物大分子选择不同免疫原的一抗标记或是对不同的生物大分子选择相同免疫原但携带不同标签的一抗标记；对不同的生物大分子分别选择不同颜色标记且与相对应的一抗结合的二抗显色。本发明的方法可使不同的分子标记不同的荧光，能够直接观察多种生物分子的分布，有利于发现分子间的相互作用。

技术领域

本发明属于生物免疫检测技术领域，具体涉及一种观察生物大分子分布的方法及应用。

背景技术

我国是传统的农业大国，对于农作物生长，发育等方面的研究一直是生物学和农学研究的重点和热点。农作物生长发育的过程，从本质上说，就是植株中重要结构和组织的构建过程，从分子水平上看，就是包括多糖，蛋白质等生物大分子相互作用，相互影响的过程。对农作物进行基础研究的关键，首先在于对这些生物大分子在植株中分布和结构的观察过程。

免疫荧光抗体标记技术是将荧光素以化学方法与特异抗体共价结合，形成免疫标记抗体，并根据抗原-抗体特异结合的原理，以荧光素对抗原进行标记，并利用荧光显微镜观察特定荧光，从而直观观察抗原在植株中的分布过程。由于抗原抗体作用具有识别的特异性，并且对于抗原组成没有特定要求，因此，该技术在解析农作物植株结构组成方面具有广泛的适用性。

目前，荧光抗体标记技术的应用已经日臻成熟，但是传统的检测方法决定了该项检测的局限性，即通过免疫荧光观测，仅能够展示单一结构的分布部位，所得到的相关信息量偏小且单一，无法从整体上对于结构之间的相互作用和相对分布进行直观的观察，这极大地限制了这项技术的应用。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明的技术方案如下：

一种观察生物大分子分布的方法，使用改进的免疫荧光染色法使样品中不同的生物大分子分别被不同的荧光或染料标记，根据标记的不同，在显微镜下同时观察不同生物大分子的分布情况；

所述改进的免疫荧光染色法为：对不同的生物大分子选择不同免疫原的一抗标记或是对不同的生物大分子选择相同免疫原并携带不同标签的一抗标记；对不同的生物大分子分别选择不同颜色标记且与相对应的一抗结合的二抗显色。

在上述方案的基础上，所述生物大分子为糖类。

在上述方案的基础上，所述的一抗为JIM系列抗体、LM系列抗体、CCRC系列抗体中的一种和CBM系列抗体中的一种的组合。

在上述方案的基础上，所述二抗为Alexa Fluor系列荧光标记抗体。

在上述方案的基础上，所述的样品为组织切片或具有良好渗透性的完整或部分植物组织。

在上述方案的基础上，所述观察生物大分子分布的方法，步骤如下：

1)材料的选择

选择组织切片或具有良好渗透性的完整或部分植物组织；

2)封闭

封闭液封闭样品恒温水平摇动1h，移除封闭液，PE缓冲液清洗。

3)一抗免疫标记

a.根据所需检测的多糖种类选择相应的一抗，将选择的一抗配置成一抗工作液，对样品进行结合；

b.移除一抗工作液，PE缓冲液清洗；

4)二抗免疫标记

①JIM/LM+CBM作为一抗时

a.向样品中加入小鼠抗His的抗体工作液，恒温水平摇动0.5h；