[发明专利]哺乳动物细胞培养有效
| 申请号： | 201711406697.2 | 申请日： | 2012-06-29 |
| 公开（公告）号： | CN107988166B | 公开（公告）日： | 2022-03-15 |
| 发明（设计）人： | B.D.富尔斯塔德;R.E.麦科伊;A.E.莫里斯 | 申请（专利权）人： | 美国安进公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12P21/02 |
| 代理公司： | 中国专利代理(香港)有限公司 72001 | 代理人： | 彭昶;万雪松 |
| 地址： | 美国加利*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 哺乳动物 细胞培养 | ||
1.一种阻滞表达重组蛋白的哺乳动物细胞培养物中的细胞生长的方法，其包括
在生物反应器中在无血清培养基中建立哺乳动物细胞培养物；
通过用L-天冬酰胺浓度小于或等于5 mM的无血清灌注培养基灌注来诱导细胞生长阻滞；
通过用L-天冬酰胺浓度小于或等于5 mM的无血清灌注培养基灌注来将所述哺乳动物细胞维持在生长受阻滞的状态，
其中所述哺乳动物细胞是中国仓鼠卵巢（CHO）细胞。
2.一种增加在表达重组蛋白的哺乳动物细胞培养物中的重组蛋白生产的方法，其包括
在生物反应器中在无血清培养基中建立哺乳动物细胞培养物；
通过用L-天冬酰胺浓度小于或等于5 mM的无血清灌注培养基灌注来诱导细胞生长阻滞；
通过用L-天冬酰胺浓度小于或等于5 mM的无血清灌注培养基灌注来将所述哺乳动物细胞维持在生长受阻滞的状态，
其中所述哺乳动物细胞是中国仓鼠卵巢（CHO）细胞。
3.一种将表达重组蛋白的哺乳动物细胞培养物限制在所需压积细胞体积下的方法，其包括
在生物反应器中在无血清培养基中建立哺乳动物细胞培养物，
通过用L-天冬酰胺浓度小于或等于5 mM的无血清灌注培养基灌注来诱导细胞生长阻滞，
通过用L-天冬酰胺浓度小于或等于5 mM的无血清灌注培养基灌注来将所述哺乳动物细胞维持在生长受阻滞的状态，
其中所述哺乳动物细胞是中国仓鼠卵巢（CHO）细胞。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述用L-天冬酰胺浓度小于或等于5mM的无血清灌注培养基灌注开始于所述培养的第3天时或之前。
5.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中诱导细胞生长阻滞在生产期之前发生。
6.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中诱导细胞生长阻滞在生产期期间发生。
7.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中细胞生长阻滞通过L-天冬酰胺饥饿诱导。
8.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其还包括温度变换，其中所述温度从35℃-38℃之间的范围降低到30℃-34℃之间的范围，其中温度变换发生在生长期与生产期之间过渡时、在生产期期间或者在生产期之前。
9.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其还包括温度变换，其中生长期发生在35℃-38℃的温度，和生产期发生在30℃-34℃的温度。
10.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其进一步包括从36℃到31℃的温度变换，其中温度变换发生在生长期与生产期之间过渡时、在生产期期间或者在生产期之前。
11.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其进一步包括从36℃到33℃的温度变换，其中温度变换发生在生长期与生产期之间过渡时、在生产期期间或者在生产期之前。
12.根据权利要求8所述的方法，其中所述温度变换在生长期与生产期之间过渡时发生。
13.根据权利要求8所述的方法，其中所述温度变换在生产期期间发生。
14.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述无血清灌注培养基中的L-天冬酰胺浓度小于或等于5 mM。
15.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述无血清灌注培养基中的L-天冬酰胺浓度小于或等于4.0 mM。
16.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述无血清灌注培养基中的L-天冬酰胺浓度小于或等于3.0 mM。
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