[发明专利]一种E-选择素的化学发光检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种E‑选择素的化学发光检测试剂盒及其制备方法。该试剂盒包括：磁微粒偶联的E‑选择素（Es）捕获抗体、吖啶酯标记的E‑选择素（Es）检测抗体、E‑选择素校准品、化学发光预激发液A、化学发光激发液B、清洗液。本发明试剂盒将化学发光技术与免疫磁微粒相结合，提供了一种接近均相的反应体系。与现有技术相比，本发明建立的直接化学发光法灵敏度高、特异性强、准确快速，检测时间短，检测结果具有更高的准确性与重复性，该试剂盒可适用于各种发光检测仪器。

技术领域

本发明属于免疫检测分析领域，具体是一种E-选择素的免疫化学发光检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

E-选择素（Es）被称为“内皮细胞白细胞黏附分子”（EL-AM-1），现已被统一命名为Es或CD62E。Es与选择素家族的其他成员相同，是一型单链糖蛋白，相对分子质量为115x103，由一系列蛋白区域片段构成，其中包括氨基末端C型植物凝集素（leotin）因子样片段、一个表皮生长因子（EGF）样片段、6个较短共同重复序列（SCR）（或补体调节/结合蛋白重复序列，每个序列约含60个氨基酸）、单一跨膜区域和一个胞浆区。与其他选择素相比，Es的主要结构特点为：补体调节型的多个重复序列与凝集素和EGF区城结合，每个补体调节重复片段含6个而不是4个半胱氨酸。Es凝集素区域与甘露糖结合蛋白紧密排列，C型凝集区域和EGF区域具有高度的保守性，使其在与配体结合方面有重要作用。

炎症在冠状动脉粥样硬化的发生、发展中的作用越来越受到人们的重视，慢性炎性反应促进了动脉粥样硬化的进展。与冠状动脉粥样硬化形成有密切关系的细胞黏附分子主要有选择素家族、整合素家族、免疫球蛋白超家族。Es是选择素家族的一员，是在炎症过程中最初出现的黏附分子。Es的作用是减慢血流中的白细胞流动，使其滚动到血管内皮表面，然后使整合素家族与其配体细胞间黏附分子-1（ICAM-1）或Es结合，使白细胞紧密黏附于内皮表面，并介导白细跑的渗出，而白细胞向血管内皮的迁移黏附是动脉粥样硬化的重要机制。冠心病患者血清可溶性Es表达增加，Es可能参与了冠心病的发病过程与冠状动脉粥样硬化的形成。所以我们对Es的检测有助于判断心绞痛患者及冠状动脉中斑块的稳定性。

目前E-选择素检测的方法有：酶联免疫法等。酶联免疫法采用的酶为辣根过氧化物酶，采用辣根过氧化物酶主要缺点为：鲁米诺在没有辣根过氧化物酶存在情况下，也会被H2O2氧化自身发光，本底相对较高，影响信噪比，反应动力学复杂，影响因素多，结果不够稳定，要得到灵敏度高且平台期长的底物不容易。本发明采用吖啶酯标记，具有如下优点：①背景发光低，信噪比高，发光反应干扰因素少；②闪光型发光，光释放快速集中、发光效率高、发光强度大；③吖啶酯分子量小，避免遮蔽抗体结合位点，提高系统整体灵敏度；④易于与蛋白质联结且联结后光子产率不减少；⑤标记物稳定，不受环境氧化剂的影响(在2-8℃下可保存数月之久)。因此吖啶取代物是一类非常有效的化学发光标记物。

本发明采用的方法为化学发光法，其优点为：灵敏度高、特异性强、准确快速、检测时间短、线性范围宽，检测结果具有更高的准确性与重复性。

发明内容

本发明提供了一种具有较高灵敏度和特异性的检测E-选择素的试剂盒。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种E-选择素的化学发光检测试剂盒及制备方法，本发明所提供的化学发光法检测E-选择素的试剂盒，采取磁微粒偶联E-选择素（Es）捕获抗体，吖啶酯标记E-选择素（Es）检测抗体。试剂盒还包括E-选择素校准品、化学发光预激发液A、化学发光激发液B以及清洗液。

作为本发明进一步的方案，所述的磁微粒可直接与E-选择素抗体偶联，也可将磁微粒与链霉亲和素偶联，同时采用生物素标记E-选择素抗体。