[发明专利]一种可卡因免疫检测试剂及其制备和检测方法

权利要求书

1.一种可卡因免疫检测试剂及其制备和检测方法，其特征在于：酶标可卡因、用于检测可卡因抗体-酶标可卡因复合物的指示试剂。

2.根据权利要求1所述的可卡因的免疫检测试剂，其特征在于：所述酶标可卡因由可卡因和葡萄糖脱氢酶偶联而成。

3.根据权利要求1所述的可卡因免疫检测试剂，其特征在于：所述指示试剂选自酶试剂，包括：酶标偶联物和酶的底物；上述酶标偶联物包括葡萄糖脱氢酶-可卡因偶联物；上述酶的底物为葡萄糖。

4.一种可卡因免疫检测试剂及其制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）葡萄糖脱氢酶-可卡因偶联物的制备：可卡因半抗原的制备，葡萄糖脱氢酶（GDH）与可卡因半抗原偶联，纯化偶联的酶标抗原；

（2）可卡因均相酶免疫检测试剂的制备：

试剂1的制备：由可卡因抗体和均相酶底物混合而成；

试剂2的制备：由葡萄糖脱氢酶-可卡因偶联物与磷酸盐缓冲液混合而成。

5.根据权利要求5所述的一种可卡因免疫检测试剂的制备方法，其特征在于，所述的步骤（1）具体过程为：

1）可卡因半抗原的制备

a. 将10-50 mg可卡因溶于2-10 mL 稀HCl中搅拌溶解，室温反应2-5小时；

b. 用稀氢氧化钠溶液调pH至中性，然后用三氯甲烷萃取，收集有机相，无水硫酸镁干燥，回收溶剂得到带羧基的可卡因半抗原；

2）葡萄糖脱氢酶（GDH）与可卡因的偶联

a. 将5-35 mg上述可卡因半抗原溶于500-2000 μL2-(N-吗啡啉)乙磺酸中，轻微振荡溶解；取10-45 mg 规格为100-300 KU的GDH溶解于PBS缓冲液中震荡均匀；

b. 将50-150 μL的碳二亚胺（EDC）溶液在搅拌下缓慢滴加到可卡因半抗原溶液中，旋转混合15-30分钟；

c. 将上述活化好的可卡因溶液在搅拌下缓慢加入到GDH溶液中，搅拌反应1-2小时；

3）纯化偶联的酶标抗原

通过G-25凝胶层析柱纯化偶联的酶标抗原，得到葡萄糖脱氢酶-可卡因偶联物，于2-8℃下储存。

6.根据权利要求5所述的一种可卡因免疫检测试剂的制备方法，其特征在于，步骤（2）的具体过程如下：

试剂1的制备：将2-5 g氧化态的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NAD、0.5-3 g葡萄糖用0.5-2 L磷酸盐缓冲液溶解制成均相酶底物；将可卡因抗体加到上述均相酶底物中，抗体与均相酶底物的体积比为1:100～1:10000；

试剂2的制备：将制备的葡萄糖脱氢酶-可卡因偶联物加到磷酸盐缓冲液中，上述偶联物与磷酸盐缓冲液的体积比为1:100～1:10000。

7.利用权利要求1至4任意一项所述的可卡因免疫检测试剂的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）将待测样本与可卡因抗体接触；

2）根据待测样本中可卡因与可卡因抗体的结合情况，利用指示试剂判断样本中可卡因的含量；所述待测样本为血清、血浆、唾液或尿液。