[发明专利]一种中药中赭曲霉毒素A的检测方法

说明书

本发明公开了一种中药中赭曲霉毒素A的检测方法，中药样品经甲醇／水体系(80：20,V／V)提取,OTA专用免疫亲和柱净化处理后,以0.5%乙酸水：乙腈(52：48,V／V)作为流动相,流速0.8 ml/min,柱温为30℃。激发波长为333 nm,发射波长为460 nm。分别以信噪比3：1和10：1测得赭曲霉毒素A对照品的检测限为0.30μg／kg,定量限为0.80μg／kg。标准曲线中OTA色谱峰面积和其浓度呈良好的线性关系。这三种中药所代表的不同类型基质中的加样回收率。在OTA添加范围1‑50μg／kg时,其回收率为89.33%～99.12%,相对标准偏差为1.16%‑6.65%。本发明方法具有快速、准确、灵敏、成本较低、节省时间、对于保障人们健康,安全使用中药,具有非常重要的意义。

技术领域

本发明属于生物与性医药领域，具体涉及生物医药检测技术。

背景技术

赭曲霉毒素A (Ochratoxins A)是由赭曲霉(Asperegillus ochraceus)、纯绿青霉(Penicillium verrucosum)和碳黑曲霉(A. carbonarius)所产生的有毒次生代谢产物。OTA的分子量为403.8,熔点169℃,为无色晶体,易溶于极性有机溶剂和碳酸氢钠溶液,微溶于水。在紫外光下OTA呈绿色荧光,最大吸收峰为333 nm。OTA广泛存在于各种食物中,可污染粮食谷物、蔬果、调味料、咖啡、啤酒、葡萄酒及干果等多种农作物和食品。另外,OTA在动物饲料中的污染也相当严重,并且在动物体内非常稳定,因此动物性食品中也常被OTA污染。OTA具有肾脏毒性、肝脏毒性、免疫毒性,以及致畸、致癌和致突变等作用,对动物和人体健康有很大的潜在危害。

发明内容

本发明的目的在于提供一种中药中赭曲霉毒素A的检测方法，具有快速、准确、灵敏、成本较低、节省时间、对于保障人们健康,安全使用中药,具有非常重要的意义

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案该方法中药样品经甲醇／水体系(80：20,V／V)提取, OTA专用免疫亲和柱净化处理后,以0.5%乙酸水：乙腈(52：48,V／V)作为流动相,流速0.8 ml/min,柱温为30℃。激发波长为333 nm,发射波长为460 nm。分别以信噪比3：1和10：1测得赭曲霉毒素A对照品的检测限为0.30μg／kg,定量限为0.80μg／kg。标准曲线中OTA色谱峰面积和其浓度呈良好的线性关系,线性回归方程为：Y=4460.3X—-1221.4(Y：峰面积,X：浓度,r=0.9999)。分别选用甘草、神曲和生谷芽空白对照样品进行加样回收实验,考察此法在这三种中药所代表的不同类型基质中的加样回收率。在OTA添加范围1-50μg／kg时,其回收率为89.33%～99.12%,相对标准偏差为1.16%-6.65%。

本发明的方法，具有如下的效果 ：在可见明显霉变的31份中药材中,有23份均能检测到OTA,且含量相差较大,其范围为1.2-158.7μg／kg；同时,在无明显霉变的26份中药材中有2份中药材中检测到少量OTA,其含量分别为2.5和5.7μg／kg。通过实验,发现霉变中药样品中OTA的检出率相当高,但其含量与发霉程度之间尚未发现明显联系。另一方面,无霉变的正常中药材样品中OTA的检出率较低,但有一份样品超出限量范围。该方法准确可靠,灵敏度高,成功地应用于中药样品中OTA含量的测定。因此,加大中药的检测范围,控制中药中OTA的限量,对于保障人们健康,安全使用中药,具有非常重要的意义。

具体实施方式

本发明提供如下技术方案该方法采用中药样品经甲醇／水体系(80：20,V／V)提取,OTA专用免疫亲和柱净化处理后,以0.5%乙酸水：乙腈(52：48,V／V)作为流动相,流速0.8ml/min,柱温为30℃。激发波长为333 nm,发射波长为460 nm。分别以信噪比3：1和10：1测得赭曲霉毒素A对照品的检测限为0.30μg／kg,定量限为0.80μg／kg。标准曲线中OTA色谱峰面积和其浓度呈良好的线性关系,线性回归方程为：Y=4460.3X—-1221.4(Y：峰面积,X：浓度,r=0.9999)。分别选用甘草、神曲和生谷芽空白对照样品进行加样回收实验,考察此法在这三种中药所代表的不同类型基质中的加样回收率。在OTA添加范围1-50μg／kg时,其回收率为89.33%～99.12%,相对标准偏差为1.16%-6.65%。在此。对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换,凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。