[发明专利]稳定低表达miR-497的HPMC细胞株及其应用

说明书

本发明公开了一种稳定低表达miR‑497的HPMC细胞株及其应用。稳定低表达miR‑497的HPMC细胞株的名称为：人腹膜间皮细胞稳定表达下调miR‑497，保藏编号为：CCTCC NO：C2017235，其基因组中含miRNA‑497inhibit质粒。用嘌呤霉素筛选HPMC稳转细胞株的筛选浓度为1.5～2.5μg/ml。HPMC稳转株中miR‑497的表达与VEGF呈负相关。本发明制备出的稳定miR‑497表达下调的HMPC细胞株可用于进一步的动物实验甚至临床试验，可用于探索PF的发生机制，寻找PF新的缓解措施，为患者继续维持PD开辟新道路。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种稳定低表达miR-497的HPMC细胞株及其应用。

背景技术

终末期肾脏病（End stage renal disease，ESRD）是21世纪全人类面临的主要健康问题之一，ESRD患者数以每年约10%的速度增长。近年来，随着高血压、肥胖、Ⅱ型糖尿病发病率的逐年升高及人口老龄化的加剧，慢性肾脏疾病（Chronic kidney disease，CKD）导致的 ESRD 患者人数急剧增多。

ESRD患者必须依赖肾脏代替治疗（Renal replacement therapy，RRT）。目前已经有肾移植、血液透析（Hemodialysis，HD）和腹膜透析（Peritoneal dialysis， PD）三大替代治疗方式。但是，RRT和HD费用昂贵，而PD具有保护残余肾功能、交叉感染少、居家透析、活动相对自由、花费相对较低等优势，已成为肾脏一体化疗法中的重要组成部分。

然而，临床研究发现，随着患者PD时间延长，高浓度葡萄糖及其在高温消毒时产生的降解产物、酸性透析液的低pH值、乳酸盐缓冲液的使用、透析液的高渗透压等生物不相容性因素和反复发作的腹膜炎，会引起腹膜形态和功能的改变，最终使腹膜纤维化（Peritoneal fibrosis，PF），导致超滤衰竭（Ultrafiltration Failure，UFF），而其具体详细的发病机制尚未明了。

目前，已有研究表明，腹膜炎症、血管新生和间皮细胞损伤是PF的重要机制。血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）在腹膜炎症、血管新生和间皮细胞损伤中发挥重要作用。miR-497高表达可抑制肿瘤组织血管新生及细胞外基质积聚。发明人前期实验已证明高糖可诱导损伤的腹膜间皮细胞miR-497表达减少，VEGF表达增多。

为了深入探索PF的发生机制，寻找PF新的缓解措施，为患者继续维持PD奠定坚实的基础，对腹膜间皮细胞进行基因改造是十分必要的。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种稳定低表达miR-497的HPMC细胞株及其应用。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

构建一种稳定低表达miR-497的HPMC细胞株，其特征在于，所述细胞株的名称为：人腹膜间皮细胞稳定表达下调miR-497，其保藏编号为：CCTCC NO：C2017235。

优选的，其基因组中含miRNA-497inhibit质粒。

设计一种用嘌呤霉素筛选所述稳定低表达miR-497的HPMC细胞株的方法，所述嘌呤霉素的浓度为1.5～2.5μg/ ml。

优选的，所述嘌呤霉素的浓度为1.8～2.2μg/ ml。

优选的，所述嘌呤霉素的浓度为2μg/ ml。

所述稳定低表达miR-497的HPMC细胞株在调控HPMC细胞VEGF表达中的应用。