[发明专利]土沉香的鉴定

说明书

本发明涉及土沉香的鉴定，并提供了用于鉴定土沉香的SNP分子标记及应用、以及基于所述SNP分子标记的用于鉴定土沉香的核苷酸序列、探针、试剂盒、制备方法和检测方法。利用这些分子生物学技术能高效、快速、灵敏且准确度高地鉴定土沉香，对于口岸物种检验工作及品种资源鉴别、种质资源保护具有重大意义。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体地说，涉及用于鉴定土沉香的SNP分子标记及其应用。

背景技术

土沉香(学名：Aquilaria sinensis(Lour.)Spreng.)，被子植物门(Angiospermae)，双子叶植物纲(Dicotyledoneae)，桃金娘目(Myrtiflorae)，瑞香科(Thymelaeaceae)，沉香属(Aquilaria)。产中国广东、海南、广西、福建，喜生于低海拔的山地、丘陵以及路边阳处疏林中。老茎受伤后所积得的树脂，俗称沉香，可作香料原料，并为治胃病特效药；树皮纤维柔韧，色白而细致可做高级纸原料及人造棉；木质部可提取芳香油，花可制浸膏。形态学鉴定是土沉香鉴定中常采用的方法，但形状特征易受生境、气候、生理状况等的影响而常常导致主观辨别上的偏差，仅靠形态差异难以准确鉴定。

近年来，利用分子生物学技术进行物种鉴定已经在一些珍惜物种及检验检疫方面得到了应用，如何利用分子生物学技术建立高效、快速、灵敏且准确度高的鉴定方法将是土沉香鉴定领域的关键技术之一。

发明内容

本发明第一个目的是提供一种用于鉴定土沉香的SNP分子标记，该SNP分子标记为SEQ ID NO.1所示序列的第65位碱基为C，若第65为碱基为C则鉴定为土沉香。

本发明第二个的目的是将上述SNP分子标记在应用于土沉香的鉴定。

本发明第三个的目的是提供一种用于鉴定土沉香的核苷酸序列，所述核苷酸序列包括SEQ ID NO.1，或者SEQ ID NO.1所对应的cDNA或mRNA，所述SEQ ID NO.1序列的第65位碱基为C。

本发明第四个的目的是提供一种包含对应于SEQ ID NO.1序列至少10个连续核苷酸并且包含所述序列的第65位碱基为C的探针。

更具体的说，所述探针序列选自SEQ ID NO.6所示序列。

本发明第五个的目的是提供一种鉴定土沉香的试剂盒，包括用于检测SEQ IDNO.1或包含有SEQ ID NO.1序列的核苷酸的反应体系，所述反应体系包含用于特异性地检测SEQ ID NO.1序列第65位碱基为C的存在与否的一种或多种引物和/或探针。

所述试剂盒的反应体系体可选择荧光PCR反应体系或测序反应体系。

所述引物或探针可选自SEQ ID NO.2至6中定义的引物或探针。

所述试剂盒还包括阳性对照、阴性对照和空白对照。在一个具体的实例中，以土沉香叶片DNA为阳性对照，云南沉香叶片DNA为阴性对照，灭菌双蒸水为空白对照。

本发明第六个的目的是提供一种鉴定土沉香试剂盒的制备方法，包括制备反应体系的步骤，所述反应体系包含用于特异性地检测SEQ ID NO.1序列第65位碱基为C的存在与否的一种或多种引物和/或探针。

本发明还提供了一种鉴定土沉香的方法，包括提取待测植物DNA和PCR反应步骤，进一步的包括检测SEQ ID NO.1序列第65位碱基为C的存在与否的步骤。

检测SEQ ID NO.1序列第65位碱基为C的存在与否的步骤可采用荧光PCR反应步骤或测序反应步骤。

上述SNP分子标记及应用、以及用于鉴定土沉香的核苷酸序列、探针、试剂盒、制备方法和检测方法，均可用于从土沉香、马来沉香或云南沉香中鉴定出土沉香。