[发明专利]一种碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液及其制备方法

说明书

本发明公开了一种碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液,含有95‑120mg/L的((4‑氯苯基)硫代)(10‑甲基吖啶‑9(10H)‑亚基)甲基磷酸二钠。进一步的，还含有3.0‑4.5mg/L的光泽精和1g/L的十二烷基磺酸钠、0.1‑1.0mM的氯化镁和/或5‑15mg/L的亚硫酸钠。在18℃‑25℃温度范围内pH值为8.85±0.1，相对发光强度RLU≤1500，碱性磷酸酶浓度为0.1ug/mL时，发光强度RLU值达32000000以上。本发明的碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液可在100s内迅速到达平台期，发光强度高，持续时间长，可达30分钟以上，满足了临床检测的需要，并且主要的性能指标已经达到了与国际相同水准，从而大大降低了发光底物的成本，提高化学发光试剂的市场竞争力和核心技术的控制力。

技术领域

本发明涉及免疫检测技术领域，具体为一种碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液及其制备方法。

背景技术

酶促化学发光底物液属于免疫诊断技术领域。本世纪70年代中期Arakawe首次报道用发光信号进行酶免疫分析，利用发光的化学反应分析超微量物质，特别是用于临床免疫分析中检验超微量活性物质。目前，这一技术已成为临床医学的常规检测手段。化学发光免疫分析(Chemiluminescence Immunoassay，CLIA)是将化学发光或生物发光体系与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。其检测原理与放射免疫(RIA)和酶免疫(EIA)相似，不同之处是以发光物质代替放射性核素或酶作为标记物，并借助其自身的发光强度直接进行测定。化学发光免疫分析既具有放射免疫的高灵敏度，又具有酶联免疫的操作简便、快速的特点，易于标准化操作。且测试中不使用有毒有害的试剂，试剂保持期长，应用于生物学、医学研究和临床实验诊断工作，成为非放射性免疫分析法中最有前途的方法之一。

化学发光系统的原理在于免疫反应中的酶作用于发光底物。发光底物在酶的作用下，底物发生化学反应并释放出大量的能量，产生激发态的中间体。这种激发态中间体，当其回到稳定的基态时，可同时发射出光子。利用发光信号测量仪器即可测量光量子产额，该光量子产额与样品中的待测物质的量成正比。由此可以建立标准曲线并计算样品中待测物质的含量。

传统的化学发光底物液是由A液(氧化剂)和B液(发光剂)二部分组成，A液和B液分开保存，使用时将A液和B液等体积混合，在10分钟之内用完，否则其稳定性就会变差，使其测试信号值急剧下降、检测范围明显变窄，稳定性变差，不便于临床应用。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有的化学发光底物液需要将A液和B液等体积混合，且需要在10分钟之内用完的缺陷，提供一种碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液及其制备方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案：

一种碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液,含有95-120mg/L的((4-氯苯基)硫代)(10-甲基吖啶-9(10H)-亚基)甲基磷酸二钠。

进一步的，还含有3.0-4.5mg/L的光泽精和1g/L的十二烷基磺酸钠。

进一步的，还含有0.1-1.0mM的氯化镁。

进一步的，还可以含有5-15mg/L的亚硫酸钠。

上述碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液在18℃-25℃温度范围内pH值为8.85±0.1，相对发光强度RLU≤1500，碱性磷酸酶浓度为0.1ug/mL时，发光强度RLU值达32000000以上。

其制备方法为，先配制0.05-0.35mol/L的tirs溶液，加入3.0-4.5mg/L的十二烷基磺酸钠、5-15mg/L的亚硫酸钠，调节pH值后，加入((4-氯苯基)硫代)(10-甲基吖啶-9(10H)-亚基)甲基磷酸二钠和光泽精。