[发明专利]一株用于防治黄瓜枯萎病的贝莱斯芽孢杆菌及其应用

说明书

本发明提供了一株用于防治黄瓜枯萎病的贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）及其应用。所述贝莱斯芽孢杆菌编号为FJ17‑4，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心登记入册的保藏号为CGMCC No.14642。本发明的贝莱斯芽孢杆菌FJ17‑4对黄瓜枯萎病菌‑‑‑尖孢镰刀菌黄瓜专化型（Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum）具有显著的拮抗作用，能有效防治黄瓜枯萎病，防治效果稳定。本发明为黄瓜枯萎病生物防治提供了优良菌种资源。

技术领域

本发明涉及微生物种质资源的开发与利用领域，具体涉及一株用于防治黄瓜枯萎病的贝莱斯芽孢杆菌及其应用。

背景技术

由尖孢镰刀菌黄瓜专化型（Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum Owen）侵染引起的黄瓜枯萎病，是黄瓜生产上一种较难防治的土传系统性病害之一，该病害具发病快、病害重、传播迅速等特点，一旦发生常造成巨大经济损失。此病的初侵染源主要是带菌的土壤、病株残体、种子和粪肥等，病菌从腐烂的寄主组织里散布到土中可营腐生活，存活时间长达5-6年或更长的时间。黄瓜枯萎病菌可借助雨水、灌溉水等进行远距离传播，整个生长期均能发生，以开花结瓜期发病最多。随着农业结构的调整和设施栽培技术的发展，黄瓜种植面积也在不断扩大，加之多年连作，使病菌在土壤中大量累积，导致黄瓜枯萎病大量暴发，并有进一步加重的趋势，发病率一般在15%-35%之间，严重时达80%-90%，甚至绝收，严重影响黄瓜的产量和品质，是限制黄瓜生产发展的关键因素之一。黄瓜枯萎病是一种典型的土传病害，病原菌侵染早期不表现症状，中后期才表现症状，目前该病害防治仍以化学杀菌剂为主，大量化学农药长期、反复使用，严重污染环境、威胁人类身心健康，使病原菌逐渐产生抗性随之变异产生很多生理小种。因此，黄瓜枯萎病防治急需绿色安全无公害且靶标性强的生物农药。

本发明从健康黄瓜根部土壤中分离到一株对黄瓜枯萎病菌具有较高拮抗能力的细菌，经微生物分类学鉴定为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）。本发明为微生物源农药的进一步研制和开发提供优良的出发菌株，同时对促进黄瓜产业的健康生产发展、增加瓜农收入、保障消费者健康、减少环境污染和维持农业可持续发展具有重大的理论和生产意义。

发明内容

本发明提供了一株用于防治黄瓜枯萎病的贝莱斯芽孢杆菌及其应用，该贝莱斯芽孢杆菌对黄瓜枯萎病具有稳定的防治作用。

一种贝莱斯芽孢杆菌，分类命名为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillusvelezensis），菌株编号：FJ17-4，已于2017年9月18日保藏于位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.14642。

本发明还提供了一种含有贝莱斯芽孢杆菌FJ17-4的生防菌剂，该生防菌剂活性成分为贝莱斯芽孢杆菌FJ17-4菌株，含菌量为1×10⁹～10¹⁰CFU/mL。

所述生防菌剂的制备方法，包括如下步骤：

（1）将低温保存的贝莱斯芽孢杆菌FJ17-4在LB平板培养基上活化，在28℃下培养24小时，得到活化的菌株；

（2）用灭菌的接种环刮取一环步骤（1）活化的菌株接种于100 mL LB液体培养基中，于振荡摇床中28℃，180rmp条件下培养至培养液OD600为0.5～0.8，获得种子液；

（3）将种子液接种于发酵培养基中扩大培养24小时，调节发酵液中贝莱斯芽孢杆菌FJ17-4的浓度至1×10⁹～10¹⁰CFU/mL，获得所述生防菌剂。