[发明专利]基于PRM检测的卵巢癌标志物检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明提供一种基于PRM检测的卵巢癌标志物检测试剂盒及其检测方法，属于卵巢癌标志物检测技术领域，用于快速准确检测5种标志物的含量，其包含常规质谱检测用试剂，重同位素标记标准肽段试管及专用的色谱分析柱，通过往血清中掺入5个卵巢癌蛋白标志物的10个人工合成的重标同位素肽段，使用PRM技术对血清中內源的5个卵巢癌蛋白标志物进行绝对定量分析，以达到帮助卵巢癌的诊断的目的，具有操作简单、耗时少、实验周期短、特异性强和灵敏度高的优点。

技术领域

本发明属于卵巢癌标志物检测技术领域，尤其涉及一种基于PRM检测的卵巢癌标志物检测试剂盒，还涉及一种使用该试剂盒的检测方法。

背景技术

卵巢恶性肿瘤是女性生殖器官常见的恶性肿瘤之一，发病率仅次于子宫颈癌和子宫体癌而列居第三位，约占女性全身恶性肿瘤的4％。但因卵巢癌致死者，却占各类妇科肿瘤的首位，对妇女生命造成严重威胁。

平行反应监测(Parallel reaction monitoring，PRM)平行反应监测属于靶向MS/MS分析，在整个液相分离过程中会不断地对每一个目标母离子的全部碎片离子图谱进行记录。相比于传统SRM只检测目标离子对的模式，PRM检测所选择的母离子窗口内的所有碎片信息。PRM主要的优势就是使用了超高分辨率的Orbitrap质量分析器，其能够将干扰信息与真实的信号进行区分，以及相比于传统的SRM方法能够更好的保证分析的选择性。

美国弗米利恩公司与Quest Diagnostics公司合作研发的OVA1测试盒能够在盆腔包块中检查出是否罹患卵巢癌，并确定是否需要手术治疗，帮助病人和医护人员确定属于什么类型的手术，以及应该由谁负责实施。OVA1卵巢癌定性血清测试将五个免疫测定组合形成一个单一数字评分系统。该免疫测试确定了五个行之有效的生物标志物---甲状腺素，载脂蛋白A-1，β2-微球蛋白(Beta2M)，转铁蛋白及癌抗原125，用来确定盆腔包块妇女可能发生肿瘤的可能性。但OVA1测试盒的检测的操作复杂、耗时长，且其灵敏度和特异性相对较差，已经不能满足需要。

发明内容

基于现有技术存在上述问题，本发明提供一种基于PRM检测的卵巢癌标志物检测试剂盒及其检测方法，用于快速准确检测5种标志物的含量，其包含常规质谱检测用试剂，重同位素标记标准肽段试管及专用的色谱分析柱，通过往血清中掺入5个卵巢癌蛋白标志物的10个人工合成的重标同位素肽段，使用PRM技术对血清中內源的5个卵巢癌蛋白标志物进行绝对定量分析，以达到帮助卵巢癌的诊断的目的，具有操作简单、耗时少、实验周期短、特异性强和灵敏度高的优点。

本发明通过以下详细技术方案达到目的：

一种适用卵巢癌PRM检测用的色谱分析柱，其包括柱管、填料和枪头，填料填充于柱管内，枪头套在柱管的一端；所述的柱管长度为115-125mm、外径为355-365um、内径为70-80um；所述的填料是2.5-3.5um粒径的C18反相填料。

其中，所述的柱管长度为120mm、外径为360um、内径为75um；所述的填料是3um粒径的C18反相填料。

一种基于PRM检测的卵巢癌标志物检测试剂盒，包括常规质谱检测用试剂、重同位素标记标准肽段试管、上述色谱分析柱、溶解buffer；所述的重同位素标记标准肽段试管包含甲状腺素、载脂蛋白A–1、β2-微球蛋白(Beta2M)、转铁蛋白和癌抗原125中的十条唯一序列，其中每个蛋白各有两段肽段序列。

其中，所述的重同位素标记标准肽段是VEHSDLSFSK、VNHVTLSQPK、EFQLFSSPHGK、HQTVPQNTGGK、GSPAINVAVHVFR、AADDTWEPFASGK、DLATVYVDVLK、DYVSQFEGSALGK、LGIWDDFIPK和ELPLLSPPQDK。

其中，所述的重同位素标记标准肽段的重同位素标记的氨基酸分别位于肽段序列C-末端的精氨酸和赖氨酸上。