[发明专利]一种蛋白质PAGE凝胶电泳快速染色试剂盒及染色方法

说明书

本发明提供一种蛋白质PAGE凝胶电泳快速染色试剂盒及其染色方法，属于蛋白质分析检测技术领域，试剂盒包括HSC染料一系列试剂、HSC染料二系列试剂和水；所述的HSC染料一系列试剂包括无水乙醇和磷酸；所述的HSC染料二系列试剂包括考马斯亮蓝G‑250、硫酸铵、磷酸、甲醇、硫酸铝，通过HSC染料一固定后再使用HSC染料二染色。本发明提供的试剂盒和方法具有实验时间短、检测灵敏度较高和质谱兼容性好等的优点。

技术领域

本发明属于蛋白质分析检测技术领域，尤其涉及一种蛋白质PAGE凝胶电泳快速染色试剂盒，还涉及一种蛋白质PAGE凝胶电泳快速染色方法。

背景技术

电泳是一种分离蛋白质和其他物质如核酸、嘌呤、嘧啶、一些有机化合物甚至无机离子的主要方法或技术，用于电泳分离蛋白质的常规检测和定量的普遍染色方法是考马斯亮蓝R250染色。

传统的考染是用考马斯亮蓝R250、甲醇、醋酸、水溶液对胶进行染色。考马斯亮蓝R250染色可以检测到30～100ng的蛋白质,灵敏度比银染和荧光染色低很多，而且操作简便，所需配置的试剂少，没有毒性，染色过程简单，染色后的对比度好，与后续的蛋白质鉴定方法兼容。但缺点是染色时间较长，需要至少一个小时的染色，一般要过夜处理，再脱色三次，总耗时需要数十小时。

发明内容

基于现有技术存在上述问题，本发明提供一种蛋白质PAGE凝胶电泳快速染色试剂盒及其染色方法，试剂盒包括HSC染料一系列试剂、HSC染料二系列试剂和水；所述的HSC染料一系列试剂包括无水乙醇和磷酸；所述的HSC染料二系列试剂包括考马斯亮蓝G-250、硫酸铵、磷酸、甲醇、硫酸铝，通过HSC染料一固定后再使用HSC染料二染色。本发明提供的试剂盒和方法具有实验时间短、检测灵敏度较高和质谱兼容性好等的优点。

本发明通过以下技术方案达到目的：

一种蛋白质PAGE凝胶电泳快速染色试剂盒，其包括HSC染料一系列试剂、HSC染料二系列试剂和水；所述的HSC染料一系列试剂包括无水乙醇和磷酸；所述的HSC染料二系列试剂包括考马斯亮蓝G-250、硫酸铵、磷酸、甲醇、硫酸铝。

其中，所述的水是超纯水。

一种使用上述试剂盒的快速染色方法，其包括以下步骤：

步骤S10制作HSC染料一，按体积比20-30:2-6分别量取无水乙醇和磷酸混合均匀，使用去离子水定容至无水乙醇终浓度为40-60％，保存于棕色瓶中备用；

步骤S20制作HSC染料二，按质量比，硫酸铝：硫酸铵＝0.5-1.5：1-4称取硫酸铝和硫酸铵，混合；按1-2g/ml的用量分别量取磷酸和超纯水并加入到酸铝和硫酸铵混合物中，加热搅拌1.5h至完全溶解；再按4-8mg/ml加入考马斯亮蓝G-250和按体积比，混合物：超纯水＝0.5-1.5:1-4加入超纯水，常温搅拌30min；搅拌结束后按体积比，混合物：甲醇＝2-4：0.5-2加入甲醇，密封搅拌10min，加入超纯水按体积比3-5:4-6对混合物定容并保存于棕色瓶中备用；

步骤S30显色反应：从电泳池取出凝胶，浸入超纯水中，轻摇清洗，将水倒干，再将凝胶浸入步骤S10制成的HSC染料一中，轻摇20-40min，倒出HSC染料一，再将凝胶浸入步骤S20制成的HSC染料二中，快速摇动20-40min，观察染色情况。

优选地，一种使用上述试剂盒的快速染色方法，其包括以下详细步骤：

步骤S10制作HSC染料一，按体积比25:4分别量取无水乙醇和磷酸混合均匀，使用去离子水定容至无水乙醇终浓度为50％，保存于棕色瓶中备用；