[发明专利]检测SARS病毒和MERS病毒用引物探针组及试剂盒和检测方法

权利要求书

1.重组酶聚合酶扩增检测重症急性呼吸综合征病毒和中东呼吸综合征病毒用引物探针组，其特征在于，包括具有SEQ ID NO.1-4所示核苷酸序列的引物，以及，含有SEQ IDNO.5-6所示核苷酸序列的探针；

其中，SEQ ID NO.5所示核苷酸序列中，自5’端起第30位碱基标记有FAM发光基团，第31位碱基后连接脱碱基位点，第33位碱基标记淬灭基团BHQ1；SEQ ID NO.6所示核苷酸序列中，自5’端起第31位碱基标记有CY5发光基团，第32位碱基后连接脱碱基位点，第34位碱基标记淬灭基团BHQ3。

2.根据权利要求1所述的引物探针组，其中，还包括具有SEQ ID NO.7-8所示核苷酸序列的引物，以及，含有SEQ ID NO.9所示核苷酸序列的探针；其中，SEQ ID NO.9所示核苷酸序列中，自5’端起第30位碱基标记有ROX发光基团，第31位碱基后连接脱碱基位点，第33位碱基标记淬灭基团BHQ2。

3.一种重组酶聚合酶扩增检测重症急性呼吸综合征病毒和中东呼吸综合征病毒的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括如下步骤：

(1)提取待测样本的总RNA；

(2)以所述总RNA为模板，并使用权利要求1或2所述的引物探针组，进行重组酶聚合酶扩增反应；

(3)收集FAM和CY5检测通道荧光信号，得到检测结果；

a)若FAM荧光通道有扩增曲线，则判定样品中含有重症急性呼吸综合征病毒；

b)若CY5荧光通道有扩增曲线，则判定样品中含有中东呼吸综合征病毒。

4.根据权利要求3所述的检测方法，其中，每条引物的最终使用浓度各为0.3-0.5μM，每条探针的最终使用浓度各自为0.08-0.15μM。

5.根据权利要求3或4所述的检测方法，其中，重组酶聚合酶扩增反应的条件包括在37-42℃下恒温扩增15-25min。

6.根据权利要求5所述的检测方法，其中，所述试剂盒还包括阳性内质控、逆转录酶、反应体系缓冲液、DNA重组酶、DNA聚合酶、单链结合蛋白、3’-5’核酸外切酶、dNTP和水中的至少一种。

7.重组酶聚合酶扩增检测重症急性呼吸综合征病毒和中东呼吸综合征病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1或2所述的引物探针组。