[发明专利]一种大内皮素-1的化学发光检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种大内皮素‑1的化学发光检测试剂盒及其制备方法。该试剂盒包括：磁微粒偶联的大内皮素‑1（ET‑1）捕获抗体、吖啶酯标记的大内皮素‑1（ET‑1）检测抗体、大内皮素‑1校准品、化学发光预激发液A、化学发光激发液B、清洗液。本发明试剂盒将化学发光技术与免疫磁微粒相结合，提供了一种接近均相的反应体系。与现有技术相比，本发明建立的直接化学发光法灵敏度高、特异性强、准确快速，检测时间短，检测结果具有更高的准确性与重复性，该试剂盒可适用于各种发光检测仪器。

技术领域

本发明属于免疫检测分析领域，具体是一种大内皮素-1的免疫化学发光检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

内皮素（ET）是一种具有多种生物学效应的活性肽。ET 家族中与肿瘤关系最密切的是ET-1，参与了许多肿瘤的发生发展过程。ET-1是从培养的猪主动脉内皮细胞上清液中，分离获得的1种具有强烈收缩血管作用的活性肽，共有3种类型，即 ET-1、ET-2和 ET-3。研究表明，ET 除可收缩血管外，还具有其它广泛的生物学活性，而且与肿瘤的关系密切。许多学者又发现肝癌、恶性血管细胞癌、乳腺癌和胰腺癌等患者血浆中ET-1的水平较正常人高，并在肝癌组织中发现了 ET-1的浓集区，因而认为肿瘤细胞本身也能产生ET-1。ET-1具有促进肿瘤细胞增殖、抑制细胞凋亡、促进肿瘤血管生成、增强细胞黏附和侵袭等多方面的作用。ET分子是由 21个氨基酸残基和两对二硫键连接4个半胱氨酸组成的双环状结构。对哺乳动物研究发现 ET家族包含3种同源异构肽，即 ET21、ET22和ET23。虽然 ET三种异构体在结构上有很多相似之处，ET21 与 ET22相差2个氨基酸，ET23与其它两种相差6个氨基酸，但是它们分别由不同的基因独立表达，其组织分布与受体的结合以及表现出的生物学效应也不尽相同。ET 在人体组织中有广泛分布，其中ET21主要由各种内皮细胞和上皮细胞表达，ET22主要存在于肾脏和小肠，而ET23主要存在于神经系统。

内皮素-1（ET-1）在肿瘤血管形成过程中的作用引起广泛的重视。ET-1可通过旁分泌的方式直接及间接的促进肿瘤中血管的生成。有研究证实ET-1在肺癌组织中高表达并参与诱导肺癌细胞的增殖。ET-l 普遍存在于肺癌细胞中。ET-l含量可能与肿瘤分化程度有一定关系。ET-l可作为肺腺癌、鳞癌的一个检测指标。肿瘤分化程度越低ET-l含量越高，肿瘤分化程度越高ET-l含量越低。

目前大内皮素-1检测的方法有：放射免疫法、酶联免疫法等。放射免疫法虽然具有高灵敏度、高特异性的优点，但其操作步骤较多，需要特殊的检测设备，试剂价格昂贵，需使用配套的仪器且存在放射性污染，使操作人员受到放射性危害；另外，放射性同位素易衰减，有效期短，不易保存。酶联免疫法采用辣根过氧化物酶，采用辣根过氧化物酶的主要缺点为：鲁米诺在没有辣根过氧化物酶存在情况下，也会被H₂O₂氧化自身发光，本底相对较高，影响信噪比，反应动力学复杂，影响因素多，结果不够稳定，要得到灵敏度高且平台期长的底物不容易。本发明采用吖啶酯标记，具有如下优点：①背景发光低，信噪比高，发光反应干扰因素少；②闪光型发光，光释放快速集中、发光效率高、发光强度大；③吖啶酯分子量小，避免遮蔽抗体结合位点，提高系统整体灵敏度；④易于与蛋白质联结且联结后光子产率不减少；⑤标记物稳定，不受环境氧化剂的影响(在2-8℃下可保存数月之久)。因此吖啶取代物是一类非常有效的化学发光标记物。

本发明采用的方法为化学发光法，其优点为：灵敏度高、特异性强、准确快速、检测时间短、线性范围宽，检测结果具有更高的准确性与重复性。

发明内容

本发明提供了一种具有较高灵敏度和特异性的检测大内皮素-1的试剂盒。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：