[发明专利]一种安非他明免疫检测试剂及其制备和检测方法

说明书

本发明公开了一种安非他明免疫检测试剂及其制备和检测方法。包括：酶标安非他明、用于检测安非他明抗体‑酶标安非他明复合物的指示试剂；上述酶标安非他明由安非他明和葡萄糖脱氢酶偶联而成。本发明的安非他明免疫检测试剂可以精确快速地确定人体血液等样品中安非他明含量。与市场上现有的检测试剂相比，本发明检测试剂具有方便快速、灵敏度高、特异性强、定量准确等优点，有利于临床的推广使用。

技术领域

本发明涉及医学检验领域，具体是一种安非他明免疫检测试剂及其制备和检测方法。

背景技术

安非他明(Amphetamine, AMPH)，又叫苯丙胺，是临床上常用的一种中枢兴奋及抗抑郁症药物。AMPH能引起深度精神作用，包括警觉性、主动性和信心提高，欣快感、疲劳感减低，语言增多，以及集中注意力的能力增强。AMPH也可引起不良反应，能产生长期脑组织的损害，最常见的是过度兴奋，有不安、失眠、震颤、紧张和烦躁等症状。服用大剂量AMPH后最严重的后果就是一种毒性神经病，因此对病人的血液药物水平进行监测非常重要。

目前检测安非他明的常用方法有：高效液相色谱分析、放射免疫测定（RIA）和荧光偏振法等。其中，高效液相色谱分析费时且不易自动化；RIA法所需时间较长，检测结果不稳定，且存在放射性污染危险。荧光偏振法需要昂贵的仪器设备和经验丰富的操作人员。

本发明采用的方法为均相酶免疫检测法，其优点为：操作简便、快速、灵敏度高、准确性好、适合于自动化，应用广泛，并且用全自动生化分析仪对小分子物质和大分子物质都能高通量快速测定。

发明内容

本发明的目的在于解决现有技术中安非他明检测过程操作复杂、以及测定准确度低的问题，本发明提供了一种快速、灵敏度高、准确检测出待测样本中安非他明含量的安非他明均相酶免疫检测试剂及其制备方法。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种安非他明免疫检测试剂及其制备和检测方法，其特征在于：酶标安非他明、用于检测安非他明抗体-酶标安非他明复合物的指示试剂；上述酶标安非他明由安非他明和葡萄糖脱氢酶偶联而成。

作为本发明进一步的方案，所述指示试剂选自酶试剂，包括：酶标偶联物和酶的底物；上述酶标偶联物包括葡萄糖脱氢酶-安非他明偶联物；上述酶的底物为葡萄糖。

作为本发明进一步的方案，所述的一种安非他明免疫检测试剂及其制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）葡萄糖脱氢酶-安非他明偶联物的制备：葡萄糖脱氢酶（GDH）与安非他明偶联，纯化偶联的酶标抗原；

（2）安非他明均相酶免疫检测试剂的制备：

试剂1的制备：由安非他明抗体和均相酶底物混合而成；

试剂2的制备：由葡萄糖脱氢酶-抗原偶联物与磷酸盐缓冲液混合而成。

作为本发明进一步的方案，所述的一种安非他明免疫检测试剂的制备方法，其特征在于，所述的步骤（1）具体过程为：

1）葡萄糖脱氢酶（GDH）与安非他明的偶联

a. 将5-30 mg安非他明溶于100-500 μL二甲基甲酰胺（DMF）中，轻微振荡溶解；同时，取10-40 mg规格为100-300 KU的GDH溶解于PBS缓冲液中震荡、均匀溶解；

b. 将安非他明溶液在搅拌下缓慢加入GDH溶液中，同时缓慢滴入10-40 μL戊二醛溶液，滴加完毕后将溶液置于4℃搅拌反应过夜；

2）纯化偶联的酶标抗原

通过G-25凝胶层析柱纯化偶联的酶标抗原，得到葡萄糖脱氢酶-安非他明偶联物，于2-8℃下储存。