[发明专利]一种追风透骨胶囊中马兜铃酸A限量检查方法

说明书

技术领域

本发明涉及医药领域，具体涉及一种中药复方制剂追风透骨胶囊中马兜铃酸A的质量控制方法。

背景技术

马兜铃酸是来源于马兜铃科植物的中药材可能含有的毒性成分。马兜铃酸具有明显肾毒性，可造成肾小管功能受损，甚至存在引发肾癌的风险。因此，为确保临床用药的安全有效，对于可能含有马兜铃酸的中药必须进行严格检测, 制定限量。

马兜铃酸是一类硝基菲类化合物, 包括马兜铃酸A、B、C和D等。研究表明, 马兜铃酸类化合物的毒性主要由马兜铃酸A或其代谢物马兜铃内酰胺所致，因此, 在检测马兜铃酸时, 常选择马兜铃酸A（又名马兜铃酸Ⅰ）为指标性成分。

目前, 检测马兜铃酸A的方法主要有薄层色谱法、紫外分光光度法、高效液相色谱法等。其中高效液相色谱法(HPLC)灵敏度较高、测定准确, 是目前测定马兜铃酸最常用的方法。但HPLC法测定条件多样，不同条件对测定结果影响较大。

本发明所述追风透骨胶囊为已上市的中药复方制剂，其处方包含二十四味药材，功能主治为：通经络，祛风湿，镇痛祛寒，用于风寒湿痹，四肢痹痛，神经麻痹，手足麻木。该药处方中含有马兜铃科植物细辛，因此需进行马兜铃酸A限量检查。

现有的马兜铃酸A限量检查方法可见于追风透骨胶囊的国家食品药品监督管理局标准YBZ04062008的【检查】项下。该方法为高效液相色谱法，其色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.5%冰醋酸（33：67）为流动相；检测波长为250nm。

我公司用上述标准方法检测不含马兜铃酸A的追风透骨胶囊细辛阴性样品时，发现在马兜铃酸A对照品岀峰位置有杂峰干扰，导致该方法专属性不强，可能导致误判，影响该产品的质量控制。因此我公司对原有方法进行了改进，开发出一种新方法，专属性优于现有方法，能更好地对追风透骨胶囊进行质量控制。

发明内容

现有的马兜铃酸A限量检查方法（高效液相色谱法）中色谱条件为0.5%冰醋酸：乙腈（67:33）等度洗脱（以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测波长250nm）。我公司在用该方法检测不含马兜铃酸A的追风透骨胶囊细辛阴性样品时发现在马兜铃酸A对照品岀峰的位置有杂峰干扰，提示该方法专属性不足。为解决该问题，本发明提供了一种追风透骨胶囊中马兜铃酸A限量检查的新方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：将原方法等度洗脱变更为梯度洗脱，将流动相B由乙腈更换为甲醇，0.5%冰醋酸和甲醇两种流动相在50分钟内的初始比例为45：55。

我公司在开发马兜铃酸A限量检查新方法的过程中摸索了多种色谱条件。在确定检测波长时发现：马兜铃酸A对照品的紫外扫描色谱中，在波长为250nm及388nm均有最大吸收，原质量标准中采用的250nm波长处马兜铃酸A的吸收强于388nm处，故仍选用250nm作为检测波长。为消除干扰并达到良好的分离效果，我们开发了梯度洗脱的方法，调整了流动相洗脱条件，将乙腈-0.5%冰醋酸（33:67）调整为乙腈-0.5%冰醋酸（40:60）为初始比例进行梯度洗脱，但分离效果仍无明显改善，细辛阴性样品对马兜铃酸A的检测仍有干扰；后将乙腈更换为甲醇，采用初始比例为甲醇-0.5%冰醋酸（40:60），进行梯度洗脱，分离效果仍不够理想；进一步调整流动相比例为甲醇-冰醋酸（55:45）后，发现在该色谱条件下，马兜铃酸A与相邻杂质峰分离效果良好，细辛阴性样品对马兜铃酸A的检测无干扰，由此确定了新方法的色谱条件。

本发明的具体方案内容如下所示。

马兜铃酸A限量 照高效液相色谱法（中国药典2015年版四部通则0512）测定。

色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.5%冰醋酸为流动相A，以甲醇为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为250nm。理论塔板数按马兜铃酸峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备 精密称取马兜铃酸A对照品5mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。