[发明专利]一种免离心制备纯化多肽或PEG修饰的金纳米颗粒的方法

权利要求书

1.免离心制备纯化多肽或PEG修饰的金纳米颗粒的方法，其特征在于：首先制备金纳米颗粒；然后采用弱的保护剂对金纳米颗粒进行保护；再将弱的保护剂保护的金纳米颗粒通过多肽或PEG进行修饰，多肽或PEG修饰后的金纳米颗粒通过免离心的方法进行纯化；纯化方法为：向多肽或PEG修饰后的金纳米颗粒悬浮液中加入盐酸，调节pH值为酸性至其颜色变为蓝灰色，静置，待其沉淀，吸走上清液即完成纯化；配体限于同时含有巯基羧基双功能基团的多肽或PEG,且整体表现为负电荷；多肽修饰的金纳米颗粒为谷胱甘肽和CALNN修饰的金纳米颗粒，多肽GSH和CALNN均为多功能配体，同时含有巯基和羧基，巯基通过形成稳定的Au-S键将多肽连接到金表面，而末端羧基可以为纳米粒子提供纯的负电荷；所述金纳米颗粒由柠檬酸钠还原法或硼氢化钠还原法制得；金纳米粒子表面弱的保护剂为柠檬酸钠或碳酸钾，金纳米粒子粒径为13 nm；具体步骤为：

1）取100 mL milli-Q水于三颈瓶中，油浴加热磁力搅拌并回流，待煮沸后依次向其中加入2 mL 1 wt % HAuCl4和4 mL柠檬酸钠溶液，溶液颜色从淡黄色变为浅灰色，蓝色，最终变成酒红色；继续加热20 min，搅拌冷却至室温，得到13 nm的金纳米颗粒；

2）将1 mL吸光度（optical density, OD）为1的柠檬酸钠保护的13nm金颗粒中加入100μL 1 mg/mL CALNN，混匀，室温放置2小时以上，CALNN修饰的金纳米表面电荷为-38.6 mV；

3）加0.1 M HCl到溶液颜色变为蓝灰色，静置，待金纳米粒子沉淀，小心移走上清液；

4）向沉淀中加入10 μL 10 mM 磷酸盐缓冲液，pH为7.4，可以观察到沉淀由灰变红，补充水到500 μL；

5）重复上述步骤，继续向红色悬浮液中加入盐酸，至其颜色变为蓝灰色，静置，待其沉淀，吸走上清液；

6）加100 μL 10 mM PBS，得到纯化的CALNN修饰的13 nm的金纳米粒子溶液，待用。