[发明专利]一种降钙素原免疫检测试剂及其制备和检测方法

说明书

本发明公开了一种降钙素原免疫检测试剂及其制备和检测方法。包括：酶标降钙素原、用于检测降钙素原抗体‑酶标降钙素原复合物的指示试剂；上述酶标降钙素原由降钙素原和葡萄糖脱氢酶偶联而成。本发明的降钙素原免疫检测试剂可以精确快速地确定人体血液等样品中降钙素原含量。与市场上现有的检测试剂相比，本发明检测试剂具有方便快速、灵敏度高、特异性强、定量准确等优点，有利于临床的推广使用。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，具体是一种降钙素原免疫检测试剂及其制备和检测方法。

背景技术

降钙素原(procaLcitonin，PCT)是降钙素的前肽，一种无激素活性的糖蛋白，由116个氨基酸组成，分子量为13KD，半衰期为25-30小时，在体内稳定性很好，不受体内激素水平的影响。正常健康人体内PCT水平很低(<0.05 ng/mL)。在细菌感染(特别是脓毒血症、革兰阴性杆菌)引起的全身炎症反应时血清PCT水平常显著增高，其增高程度与感染严重程度和死亡率呈正相关。在全身细菌感染患者血清PCT浓度升高比C反应蛋白（CRP）及其它炎性因子出现早，在感染2 h出现升高，6 h急剧上升，8～24 h维持高水平，且对全身与局部细菌性感染的鉴别具有特殊价值。目前认为PCT可能是一种内源性非类固醇类抗炎物质，多在细菌感染时诱导产生，在调控细胞因子网络中发挥着重要作用，是用于检测严重细菌感染的一个重要诊断标志，也是一种敏感的判定炎症类别和活动情况的指标。

目前检测降钙素原的常用方法有：凝胶层析及高效液相色谱分析、酶联免疫吸附测定（ELISA）、放射免疫测定（RIA）、免疫发光法和胶体金层析法。其中，凝胶层析及高效液相色谱分析费时且不易自动化；ELISA法定量准确性差、操作时间长、自动化程度低，多用于定性检测；RIA法所需时间较长，检测结果不稳定，重复性比ELISA差，且存在放射性污染危险。免疫发光法特异性强，敏感性高，但需要昂贵的仪器设备和经验丰富的操作人员，一般多在特定医疗机构使用。胶体金层析法虽稳定性较好，但灵敏度较低，一般只能定性，不能定量。

本发明采用的方法为均相酶免疫检测法，其优点为：操作简便、快速、灵敏度高、准确性好、适合于自动化，应用广泛，并且用全自动生化分析仪对小分子物质和大分子物质都能高通量快速测定。

发明内容

本发明的目的在于解决现有技术中降钙素原检测过程操作复杂、以及测定准确度低的问题，本发明提供了一种快速、灵敏度高、准确检测出待测样本中降钙素原含量的降钙素原均相酶免疫检测试剂及其制备方法。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种降钙素原免疫检测试剂及其制备和检测方法，其特征在于：酶标降钙素原、用于检测降钙素原抗体-酶标降钙素原复合物的指示试剂；上述酶标降钙素原由降钙素原和葡萄糖脱氢酶偶联而成。

作为本发明进一步的方案，所述指示试剂选自酶试剂，包括：酶标偶联物和酶的底物；上述酶标偶联物包括葡萄糖脱氢酶-降钙素原偶联物；上述酶的底物为葡萄糖。

作为本发明进一步的方案，所述的一种降钙素原免疫检测试剂及其制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）葡萄糖脱氢酶-降钙素原偶联物的制备：制备葡萄糖脱氢酶（GDH）溶液，降钙素原的活化，将GDH与降钙素原偶联，纯化偶联的酶标抗原；

（2）降钙素原均相酶免疫检测试剂的制备：

试剂1的制备：由降钙素原抗体和均相酶底物混合而成；

试剂2的制备：由葡萄糖脱氢酶-抗原偶联物与磷酸盐缓冲液混合而成。

作为本发明进一步的方案，所述的一种降钙素原免疫检测试剂的制备方法，其特征在于，所述的步骤（1）具体过程为：

1）葡萄糖脱氢酶（GDH）溶液的制备：