[发明专利]可有效提高水产动物抗病能力的复合制剂及制备方法

权利要求书

1.一种可有效提高水产动物抗病能力的复合制剂，其特征在于各组分及质量配比如下：微生物菌粉55~65，黄芪多糖10~15，酵母细胞壁10~15，植物精油5~10，维生素B6 1~5；所述微生物菌粉是由地顶孢霉菌粉（Acremonium terricola）与丁酸梭菌粉（Clostridium butyricum）按质量比35~50：15~30混合而成，所述酵母细胞壁为含30％β-葡聚糖的面包酵母细胞壁，所述植物精油由桂皮醛、百里香酚、熏衣草精油按质量比2~4：2~4：1~2混合而成；所述复合制剂中地顶孢霉菌粉有效成分≥200mg/g，丁酸梭菌粉活菌数≥5×108CFU/g，所述地顶孢霉菌保藏编号ATCC13215（NBRC30538）并经中国菌种保藏管理中心 CICC鉴定，所述丁酸梭菌保藏编号为CICC No.M 23847。

2.一种如权利要求1所述可有效提高水产动物抗病能力的复合制剂的制备方法，其特征在于具体步骤如下：

A 制备微生物菌粉

（1）制备地顶孢霉菌粉

a. 菌种活化

将地顶孢霉菌冻干粉接种至PDA培养基上，25℃培养7天；

b. 种子培养

将活化后的菌种以2％的接种量转接于摇瓶中，25℃恒温摇床振荡培养24~36h得种子培养液，液体培养基组分的质量百分比为：白砂糖1.4％、蚕蛹粉2.3％、酵母粉1.2％、水余量，pH值为6.5；

c. 发酵罐培养

种子培养液以20％的接种量接入50L发酵罐，装量系数为70％，经48~60h通气培养即可放罐，发酵罐培养基组分的质量百分比为：黄豆粉2.8%、白砂糖2.5%、酵母粉1.3%、蚕蛹粉2.5%、MgSO4 0.05%、KH2PO4 0.05%、消泡剂0.05%，水余量，用饱和NaOH调pH值为6.5；

d.固体发酵培养

将c步骤得到的发酵菌液以20%（v/m）的接种量接入灭菌后的固体发酵培养基上，固体培养基的组分质量百分比为：玉米粉55%、豆粕32%、麦麸13%；培养条件为：25℃，湿度70％，发酵时间72h；

e. 地顶孢霉培养物的收集

待固体发酵结束后，收集培养物，直接60~80℃烘干至水分＜10％，然后将其粉碎并过40目筛，即为含多糖94mg/g、多肽28mg/g及生物量35mg/g等有效成分的地顶孢霉菌粉；

（2）制备丁酸梭菌菌粉

a .菌种活化

挑取丁酸梭菌冻干粉接入活化培养基，静置厌氧培养；培养基组成：蛋白胨10g，牛肉浸膏10g，酵母浸膏3g，葡萄糖10g，NaCl 5g，NaAc 3g，盐酸半胱氨酸0.5g，CaCO3 3g，蒸馏水定容至1000mL，pH 7.0，37℃培养24h，以2%的接种量转接于新的活化培养基，相同条件下培养48h；

b.种子培养

将菌液以10％的接种量接入10L种子罐，装量系数为70％，种子培养基组成为：蛋白胨5~10g，牛肉浸膏5~10g，酵母浸膏3~10g，葡萄糖5~10g，NaCl 5g，NaAc1~3g，CaCO3 1~3g，蒸馏水定容至1000mL，pH 7.0，37℃静置厌氧培养20h；

c. 发酵罐培养

种子培养液以10％的接种量接入100L发酵罐，装量系数为70％，发酵罐培养基组成为：蛋白胨5~10g，酵母浸膏3~10g，葡萄糖5~15g，淀粉0.5~1g，NaCl 5g，NaAc 1~3g，CaCO3 3~10g，水定容至1000mL，pH 7.0，37℃静置厌氧培养24h；

d. 菌体收集

收集发酵液，离心后弃上清，获得湿菌体；将丁酸梭菌湿菌体与干淀粉以质量比1∶0.5~5混合，50℃干燥24h，粉碎机粉碎，过60目筛，调节丁酸梭菌的活菌数≥1×1010CFU/g，即为丁酸梭菌原菌粉；

B 分别将黄芪多糖、酵母细胞壁、维生素B6粉碎后过60目筛，之后将黄芪多糖、酵母细胞壁、维生素B6、地顶孢霉培养物、丁酸梭菌粉及植物精油放入搅拌设备，搅拌均匀即可。