[发明专利]一种鉴定金黄色葡萄球菌是否耐药的方法

说明书

本发明公开了一种鉴定金黄色葡萄球菌是否耐药的方法。该方法包括：采用MALDI‑TOF/TOF质谱仪对待测金黄色葡萄球菌进行检测，获得MALDI指纹图谱；采用mascot搜索引擎将MALDI指纹图谱与SEQ ID No.1进行比对，如果MALDI指纹图谱与SEQ ID No.1不匹配，则所述待测金黄色葡萄球菌为或候选为耐药菌株；如果MALDI指纹图谱与SEQ ID No.1匹配，则所述待测金黄色葡萄球菌不为或候选不为耐药菌株。该方法操作简便，可快速准确地鉴别耐药菌和敏感菌，整个流程不超过10分钟，具有耗时短、灵敏度高、特异性高的优点，可为临床治疗由该类细菌引起的严重感染争取宝贵的时间。

技术领域

本发明属于医药检测技术领域，特别涉及一种鉴定金黄色葡萄球菌是否耐药的方法。

背景技术

自1928年英国科学家亚历山大·弗莱明发现青霉素以来，抗菌药物的应用使得全球每年有数千万人受益。随着抗菌药物的广泛使用，耐药细菌不断涌现，“超级细菌”的产生和快速传播使得细菌耐药已成为国内、外高度关注的重大公共卫生问题之一。高效、便捷、实用性强的耐药细菌检测方法对于大规模监测细菌耐药、探究耐药机制、防控耐药细菌流行传播十分重要。

细菌药物敏感性试验是目前国内、外临床和实验室最常用的细菌耐药性检测方法，有纸片法、琼脂稀释法、肉汤稀释法、浓度梯度法等，其中除纸片法外，其余方法均可以获得相对精确的药物最低抑菌浓度(Minimum Inhibitory Concentration,MIC)。近十几年来，借助工业技术的创新，已出现商品化自动药敏检测及分析系统，由于其操作流程的自动化和标准化，目前广泛应用于临床抗感染诊断和治疗以及基层实验室细菌耐药性的日常检测。上述这些方法经典稳定，但都有各自的局限性。一方面上述几种方法操作繁琐、时间长、灵敏度低、特异性差、整个过程影响因素较多；另一方面药物选择的灵活性较差。

发明内容

本发明的目的是提供一种鉴定金黄色葡萄球菌是否耐药的方法。

本发明所提供的鉴定待测金黄色葡萄球菌是否耐药的方法，具体可包括如下步骤：

(a)采用MALDI-TOF/TOF质谱仪对待测金黄色葡萄球菌进行检测，获得MALDI指纹图谱；

(b)采用mascot搜索引擎，将步骤(a)获得的所述MALDI指纹图谱与79AA特征序列进行比对，所述79AA特征序列如SEQ ID No.1所示，根据比对结果按照如下确定所述待测金黄色葡萄球菌是否耐药：如果所述MALDI指纹图谱与所述79AA特征序列不匹配，则所述待测金黄色葡萄球菌为或候选为耐药菌株；如果所述MALDI指纹图谱与所述79AA特征序列匹配，则所述待测金黄色葡萄球菌不为或候选不为耐药菌株(即为或候选为药物敏感菌株)。其中，采用mascot搜索引擎将所述MALDI指纹图谱与所述79AA特征序列进行比对后，若所得菌株鉴定分值大于等于50分，视为所述MALDI指纹图谱与所述79AA特征序列匹配；若所得菌株鉴定分值小于50分，视为所述MALDI指纹图谱与所述79AA特征序列不匹配。

在步骤(a)中，采用所述MALDI-TOF/TOF质谱仪对所述待测金黄色葡萄球菌进行检测前还包括如下步骤：将所述待测金黄色葡萄球菌接种到固体培养基上培养成单菌落(35℃培养24h)；挑取单菌落涂布于所述MALDI-TOF/TOF质谱仪的靶盘圆点处，涂布厚度大于0mm且小于1mm；然后覆盖基质。

进一步地，所述基质可为α-氰基-4-羟基肉桂酸(CHCA)。

其中，采用所述MALDI-TOF/TOF质谱仪对所述待测金黄色葡萄球菌进行检测时设置参数如下：Shots为500，激光能量85％，谱图采集范围200～20000m/z。