[发明专利]一种红花木莲外植体消毒方法、外植体及其应用

说明书

本发明涉及一种红花木莲外植体消毒方法、外植体及其应用。所述消毒方法包括：使用质量分数为0.1～0.3％的HgCl2溶液对经过预处理的外植体进行消毒，消毒时间为8～10min。本发明所述方法不但杀灭红花木莲外植体表面细菌的效果好，外植体污染率低，同时还兼顾保持外植体的活力，使外植体的杀伤率维持在较低水平，从而在整体上提高外植体的存活率。

技术领域

本发明涉及组培领域，具体而言，涉及一种红花木莲外植体消毒方法、外植体及其应用。

背景技术

红花木莲(Manglietia insignis(Wall.)Bl.)为木兰科木莲属植物，被列为国家三级保护珍稀树种，属常绿阔叶乔木。红花木莲不仅是名贵稀有的园林观赏树种，而且具有很高的经济价值和药用价值。其花色鲜艳夺目；其果实为深红色，悬挂枝头，颇为美观，成为秋天一大景观；其树干通直，木材纹理通直，结构细密，有光泽、香味，心材耐腐，不翘不裂，加工容易，是优良的装饰用材和胶合板材树种；其树皮和枝皮具有行气醒脾、消积导滞的功效，用于脾湿所致纳呆少食、腹胀、脘腹不舒等症；治食积胃脘而腹痛、腹泻、嗳腐吞酸、舌苔厚腻等症。

红花木莲在自然界以零星分布为主，产于湖南西南部、广西、四川西南部、贵州(雷公山、梵净山、安龙)、云南(景东、无量山、红河、文山)、西藏东南部。生于海拔900-2600m常绿阔叶林或常绿落叶阔叶混交林中。尼泊尔、印度东北部、缅甸北部也有分布。在中国，至今全国尚未发现成片的红花木莲纯林，仅在云南发现一片混交林，是全国迄今发现最大的自然群落。

红花木莲分布区域广但分布零星，又由于红花木莲成熟胚囊的卵细胞败育率高和人为采伐利用等种种原因，成年植株数量逐渐减少，到濒危的境地。组织培养技术是保护濒危植物的有效途径之一。

利用组织培养技术，外植体的选取、预处理、消毒方法是组织培养技术成功的关键，也是保证成活率的关键。红花木莲腋芽比较鲜嫩，同时外带菌类较多，消毒较难。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种红花木莲外植体消毒方法，所述方法能够有效杀灭外植体表面的细菌，减少污染率，从而提高外植体在组培过程中的存活率。

本发明的第二目的在于提供一种根据上述方法获得的外植体，所述外植体具有消毒彻底、存活率高的优点。

本发明的第三目的在于提供一种上述外植体在制备红花木莲组培苗中的应用，上述应用具有显著提高组培的成功率。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种红花木莲外植体消毒方法，所述方法包括：使用质量分数为0.1～0.3％的HgCl2溶液对经过预处理的外植体进行消毒，消毒时间为8～10min。

本发明考察不同浓度的HgCl2、NaClO和Ca(ClO)2溶液以及HgCl2溶液的不同消毒时间对红花木莲外植体的消毒效果和成活率的影响，最终确定采用本发明上述方法对红花木莲进行消毒，该消毒方式不但杀灭红花木莲外植体表面细菌的效果好，与其他消毒剂或消毒时间相比，显著降低外植体的污染率，同时还兼顾保持外植体的活力，使外植体的杀伤率维持在较低水平，从而在整体上提高外植体的存活率。

在一些实施方式中，所述消毒的具体方式包括：(1)使用乙醇溶液浸润外植体；(2)使用无菌水洗涤所述外植体；(3)使用HgCl2溶液浸润所述外植体，之后，使用无菌水洗涤并去除表面水分，置于无菌条件下备用，即得经过消毒的外植体。