[发明专利]一种测定透明质酸钠凝胶中填充的交联葡聚糖含量的方法

说明书

本发明涉及一种测定透明质酸钠凝胶中填充的交联葡聚糖含量的方法，包括如下步骤：1)采用裂解气相色谱‑质谱联用法对若干组质量不同的交联葡聚糖纯品进行高温裂解分析，并根据裂解色谱图得到特征裂解峰的峰面积与质量的线性关系；所述特征裂解峰为丙三醇的特征裂解峰；2)继续对待测样品进行高温裂解分析，根据所述特征裂解峰的出峰时间得到待测样品的特征裂解峰的峰面积，之后得到待测样品中填充的交联葡聚糖的质量或含量。该方法操作简便快捷，结果准确可靠。

技术领域

本发明涉及分析检测领域，具体涉及一种测定透明质酸钠凝胶中填充的交联葡聚糖含量的方法。

背景技术

交联葡聚糖是将纯化后的线性葡聚糖(吡喃型葡聚糖)与环氧氯丙烷反应，再导入丙三醇侧链，而在葡聚糖链间以醚键形成交联的三维空间网状结构的高分子化合物，通常为白色珠状微粒。

目前，交联葡聚糖的品质指标主要有：粒径分布、微生物、内毒素、工作pH值、操作温度、分子量分离范围等。交联葡聚糖广泛应用于凝胶过滤，分离分子量大小不同的蛋白质、酶、核酸和多糖类高分子化合物。交联葡聚糖具有复杂的空间网状结构，可作为药物的负载物，进入血液后能够有效的达到目标地点，防止因过早降解导致负载药物的释放而使效果降低。

此外，用交联葡聚糖填充修饰透明质酸钠，可以降低人体内特定酶分解透明质酸钠的速度，保持效力，具有较高的临床价值，可用于治疗关节炎，加速伤口愈合，也可添加到化妆品达到保湿和抗皮肤老化的功能。

黏膜填充修饰用透明质酸钠凝胶医用新材料中填充有交联葡聚糖，可用于替代进口产品，但至今还没有医用新材料中填充交联葡聚糖的相关定量检测技术。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的空缺，提供一种测定透明质酸钠凝胶中填充的交联葡聚糖含量的方法，该方法操作简便快捷，结果准确可靠。

本发明所提供的技术方案为：

一种测定透明质酸钠凝胶中填充的交联葡聚糖含量的方法，包括如下步骤：

1)采用裂解气相色谱-质谱联用法对若干组质量不同的交联葡聚糖纯品进行高温裂解分析，并根据裂解色谱图得到特征裂解峰的峰面积与质量的线性关系；所述特征裂解峰为丙三醇的特征裂解峰；

2)继续对待测样品进行高温裂解分析，根据所述特征裂解峰的出峰时间得到待测样品的特征裂解峰的峰面积，之后得到待测样品中填充的交联葡聚糖的质量或含量。

本发明待测样品透明质酸钠凝胶中包含交联葡聚糖和透明质酸钠。透明质酸钠凝胶的主要特征裂解峰为1-羟基-2-丙酮、2-羟基乙醛、乙酸、丙酮酸甲酯、1,3-环戊二酮、乙酰胺、3-甲基环戊烷-1,2-二酮、麦芽酚、1,3-二羟基丙酮、3,5-二羟基-2-甲基-4-吡喃酮、丙三醇、丙位戊内酯、1,4-二氧六环-2-醇、1,6-脱水-β-D-吡喃葡萄糖。而其中仅在交联葡聚糖中出现的特征裂解峰为丙酮酸甲酯、1,3-环戊二酮、3-甲基环戊烷-1,2-二酮、麦芽酚、1,3-二羟基丙酮、3,5-二羟基-2-甲基-4-吡喃酮、丙三醇、1,4-二氧六环-2-醇、1,6-脱水-β-D-吡喃葡萄糖。

本发明创造性地发现其中丙三醇的特征裂解峰的峰面积与交联葡聚糖的质量成线性关系。利用气相色谱-质谱联用技术分离分析该体系的裂解组分，根据交联葡聚糖的特征裂解组分对其进行定性，并根据仅出现在交联葡聚糖中的裂解特征组分(丙三醇)的峰面积对交联葡聚糖进行定量测定，该方法可以同时实现定性和定量分析。

本发明根据丙三醇特征裂解峰的峰面积与交联葡聚糖质量的线性关系，即以交联葡聚糖特征裂解组分的峰面积为纵坐标，以交联葡聚糖质量为横坐标制作标准曲线，得到交联葡聚糖纯品的标准曲线，根据标准曲线和公式(1)计算凝胶样品中交联葡聚糖的百分含量。