[发明专利]一种两步法建立间充质干细胞软骨分化后骨关节炎样细胞模型的方法

权利要求书

1.一种胎源性骨关节炎样细胞模型，其特征在于，所述细胞模型由以下方法构建，包括如下步骤：

1）建立脐带Wharton 胶来源的间充质干细胞软骨细胞定向分化模型：将第3代脐带Wharton 胶来源的间充质干细胞传代，以海藻酸钠微球作为生物支架对第4代间充质干细胞进行三维培养，微球制备完成后，以普通完全培养基培养24小时，然后加入软骨分化培养基进行诱导分化，在体外37℃、湿度95%、CO₂浓度5%的细胞培养箱内培养21天，其间隔天更换软骨分化培养基一次，将间充质干细胞向软骨定向分化，获得软骨细胞；其中，软骨分化培养基的成分为：95%DMEM/F12培养基、5%Gibco小牛血清、1%100×ITS、100 nM地塞米松、10ng/mL TGFβ1、40 μg/mL脯氨酸、50 μg/mL抗坏血酸、100 mg/L丙酮酸和10%青链霉素；

2）使用含10 ng/ml重组人IL-1β的DMEM/F12培养基处理步骤1）定向分化后的细胞24小时，进行骨关节炎造模；

3）模型的评估：如果检测到步骤2）建立的细胞模型中软骨表型基因aggrecan、Col2α1的表达显著下降、基质降解相关基因MMP3、MMP13、ADAMTS3的表达显著增加以及阿利新蓝、番红O染色变浅，则该模型建立成功；

步骤3）中软骨表型基因aggrecan检测所用的引物对的序列如SEQ ID NO：1-2所示，Col2α1表达的检测所用引物对的序列如SEQ ID NO：3-4所示，基质降解相关基因MMP3表达的检测所用引物对的序列如SEQ ID NO：11-12所示，MMP13表达的检测所用引物对的序列如SEQ ID NO：13-14所示，ADAMTS3表达的检测所用引物对的序列如SEQ ID NO：15-16所示。

2.权利要求1所述的胎源性骨关节炎样细胞模型的用途，其特征在于，将该模型用于筛选或鉴定宫内环境干扰物或治疗胎源性骨关节炎的药物。

3.权利要求1所述的胎源性骨关节炎样细胞模型的用途，其特征在于，将该模型用于制备对胎源性成年骨关节炎易感的早期预警检测产品。