[发明专利]一种让多化性家蚕产滞育卵的多肽、制备方法及应用

说明书

本发明公开了一种让多化性家蚕产滞育卵的多肽、制备方法及应用。依照序列TDMKDESDRGAHSERGALWFGPRLa，从C端(羧基端)向N端(氨基端)进行合成家蚕滞育激素多肽；采用荧光素酶报告基因法检测合成的家蚕DH多肽活性；将家蚕DH活性多肽液过滤膜除菌，注射入每代均产非滞育卵的多化性品种家蚕化蛹后2‑3天的雌蚕蛹腹部，化蛾后正常交配，产下滞育卵。本发明让多化性品种家蚕产滞育卵，对于研究家蚕胚胎滞育机制、进一步利用家蚕胚胎滞育进行传统养蚕业的技术革新与经济效益提高等，具有积极作用。

技术领域

本发明涉及了一种让多化性家蚕产滞育卵的多肽、制备方法及应用。

背景技术

滞育(Diapause)是昆虫在个体发育的某个特定阶段主动停止发育的一种现象，它作为一种遗传特性，在昆虫的生存、进化、繁荣等中发挥着重要的作用。家蚕(Bombyx mori)为卵滞育型，多化性(polyvoltine)品种蚕每代都产非滞育卵。非滞育卵不但不易保存而十分不利于蚕种生产，而且非滞育性品种蚕的经济性状差。所以对家蚕滞育现象的研究，一直为人们所关注。

蚕卵是否发生滞育，主要取决于蛹期由咽下神经节(Subpharyngeal ganglion，SG)合成和分泌的滞育激素(Diapause hormone，DH)作用。当合成和分泌的DH作用于卵巢和发育中蚕卵，引起多种基因表达上调，从而改变蚕卵内的物质代谢，成为滞育卵；反则蚕卵胚胎不停地向前发育，在产下后约经10d左右便形成幼虫而孵化，成为非滞育卵。但有关家蚕DH是通过怎样的方式传递滞育信号，来调控家蚕卵滞育等，均缺乏研究。

发明内容

为了解决背景技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种让多化性家蚕产滞育卵的多肽、制备方法及应用，是采用家蚕DH多肽的合成，合成程度、纯度和活性的分析检测，再给雌蚕蛹腹部注射的方法，通过家蚕DH的调控作用，让多化性品种家蚕产滞育卵。

为了达到上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一、一种让多化性家蚕产滞育卵的多肽：所述多肽的氨基酸序列如SEQID No.1，即为TDMKDESDRGAHSERGALWFGPRLa。

本发明构建如SEQID No.1的氨基酸序列TDMKDESDRGAHSERGALWFG PRLa，从C端(羧基端)向N端(氨基端)合成家蚕滞育激素(DH)多肽。

二、一种让多化性家蚕产滞育卵的多肽的制备方法：

1)将序列TDMKDESDRGAHSERGALWFGPRLa中的每一个氨基酸预先用9-芴甲氧羰基(Fmoc)基团对α-氨基进行保护处理；

2)耦联反应：按氨基酸序列将一个已保护的氨基酸通过对烷氧苄醇支臂共价连接到不溶性的对烷氧苄醇型树脂固相载体上，得到氨基酸--支臂--树脂；

3)脱保护和耦联反应：用90％质量分数的三氟乙酸(TFA)溶液对步骤2)获得的氨基酸--支臂--树脂进行处理，脱掉α-氨基上的9-芴甲氧羰基(Fmoc)基团，再用90％质量分数的三氟乙酸(TFA)溶液洗涤氨基酸--支臂--树脂，然后用下一个已保护的氨基酸重复步骤2)进行耦联反应连接到对烷氧苄醇型树脂固相载体上；

4)重复步骤2)～3)按照序列TDMKDESDRGAHSERGALWFGPRLa的氨基酸顺序对其中的全部氨基酸依次连接到对烷氧苄醇型树脂固相载体上，得到目的多肽；

5)用氟化氢(HF)对目的多肽进行处理，水解肽链和固相载体之间的酯键，得到多肽合成液即家蚕DH多肽合成液。

所述多肽合成液中不含游离氨基，多肽合成液中的所述多肽纯度在95％以上。

具体实施采用茚三酮显色法检测合成的家蚕DH多肽合成液，检测不到游离氨基，确保氨基酸之间连接完全。