[发明专利]用于大肠杆菌氟喹诺酮类抗生素耐药性的检测试剂盒、检测方法及应用

说明书

本发明涉及微生物耐药性技术领域，具体公开一种用于大肠杆菌氟喹诺酮类抗生素耐药性的检测试剂盒、检测方法及应用。本发明通过设计与喹诺酮抗性相关的emr耐药通路和mdt耐药通路的16个基因的引物，并且以16S rDNA为内参基因，使用高通量荧光定量PCR仪进行扩增，并且通过数据处理，细菌的氟喹诺酮相关基因的相对表达量和细菌之间的差异表达倍数可以直观地反应出来，相较于药敏试验的粗略判定耐药性。该方法更加科学和严谨。

技术领域

本发明涉及微生物耐药性技术领域，尤其涉及一种用于大肠杆菌氟喹诺酮类抗生素耐药性的检测试剂盒、检测方法及应用。

背景技术

临床检验医学中最常用的方法是K-B纸片法，目前，美国National committee forclinical laboratory standards(Nc CLS)纸片扩散法敏感实验分委会，所推荐的标准方法，是以Bauer-Kirby创立的K-B法为基础，作为目前公认的标准的实验方法。将药敏纸片(含有定量抗菌药物纸片)贴在己经接种待检菌的琼脂平板标明的特定部位，原理为药物借其分子扩散力向周围琼脂中扩散，随药源距离加大，琼脂中药物浓度也逐渐减少的梯度浓度。药敏片药源周围一定区域内琼脂药物浓度恰恰高于抑制待检菌时，该区域内，细菌不能生长，形成一个透明的抑菌圈。抑菌圈的大小则可反应待检菌对测定药物的敏感程度。但是传统的K-B药敏法测定效率低，误差大。

发明内容

针对现有药敏法测定效率低，误差大等问题，本发明提供一种用于大肠杆菌氟喹诺酮类抗生素耐药性的检测试剂盒。

进一步地，本发明还提供一种用于大肠杆菌氟喹诺酮类抗生素耐药性的检测方法。

进一步地，本发明还提供用于大肠杆菌氟喹诺酮类抗生素耐药性的检测试剂盒和用于大肠杆菌氟喹诺酮类抗生素耐药性的检测方法子啊大肠杆菌氟喹诺酮类抗生素耐药性检测中的应用。

为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下的技术方案：

一种用于大肠杆菌氟喹诺酮类抗生素耐药性的检测试剂盒，所述检测试剂盒用于高通量荧光定量PCR检测大肠杆菌氟喹诺酮类抗生素耐药性，包括以 16S rDNA为内参基因的emrB、emrA、emrE、emrK、emrR、emrY、mdtK、 mdtA、mdtE、mdtG、mdtH、mdtD、mdtM、mdtN、mdtO、mdtP基因的引物，所述引物的序列如下所示：

16S的上游引物：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG；

16S的下游引物：GGTTACCTTGTTACGACTT；

emrB的上游引物：CTTTTCTCTAACCGTACATTATCTACGATAAA；

emrB的下游引物：AGAACGTAGCGACTGATAAAATGCT；

emrA的上游引物：CTGCTCCTCCTTCTCACCTTG；

emrA的下游引物：TTATCGGCCCAGACTTTCGT；

emrE的上游引物：ATCTTGGTGGTGCAATACTTG；

emrE的下游引物：GGACAATACCGACTCCTGAC；

emrK的上游引物：ATGCCACTATCGCACTCAA；

emrK的下游引物：TGGTATGCTCCAGCGTTTC；

emrR的上游引物：TTTACCGCCGCAGCATAAC；

emrR的下游引物：ACACCGCCCTGTTCCATCT；

emrY的上游引物：TTAGTGCTCGGTGTTGGTG；