[发明专利]3-磷酸甘油醛脱氢酶及其多克隆抗体

说明书

本发明涉及分子生物学领域，尤其涉及一种3‑磷酸甘油醛脱氢酶及其多克隆抗体。3‑磷酸甘油醛脱氢酶的多克隆抗体的制备方法，包括步骤：1)以氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的3‑磷酸甘油醛脱氢酶为抗原，免疫小鼠制备抗血清；2)纯化抗血清得到3‑磷酸甘油醛脱氢酶的多克隆抗体。本发明利用PCR技术在喜冷杆菌属Cryobacterium中扩增得到3‑磷酸甘油醛脱氢酶基因，并通过基因工程技术得到Ecoli BL21‑pET21a‑GPR重组菌株，诱导表达重组菌株得到3‑磷酸甘油醛脱氢酶蛋白，该蛋白具有较好的低温耐受，而且以3‑磷酸甘油醛脱氢酶为抗原成功得到3‑磷酸甘油醛脱氢酶的多克隆抗体，该多克隆抗体能够准确检测3‑磷酸甘油醛脱氢酶。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，尤其涉及一种3-磷酸甘油醛脱氢酶及其多克隆抗体。

背景技术

3-磷酸甘油醛脱氢酶，英文名(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPD)。3-磷酸甘油醛脱氢酶，它可以催化3-磷酸甘油醛氧化(脱氢)和磷酸化，生成1，3-二磷酸甘油酸，是糖代谢的中心环节，故对糖代谢起着重要的作用。3-磷酸甘油醛脱氢酶广布于人体各组织器官，脂肪组织含量较低，肺含酶量约为脂肪组织的10倍，肝、心含量相近，约为脂肪组织的30倍，以骨骼肌、红细胞和肾中的含量最为丰富。急性肝炎、酒精性肝病、肝硬变等可致血清GAPD总活性升高。慢性肾盂肾炎、多发性骨髓病、肺炎、肺气肿等病人血清GAPDA活性呈不同程度的升高。

3-磷酸甘油醛脱氢酶的应用前景十分广阔，它是糖代谢的中心环节，对糖代谢起着重要的作用，而对于体内缺乏此酶，糖代谢有问题的病人，通过食用含有此酶的药物，可以使病情得以缓解，治疗。该酶还分布于人体各组织器官故通过对3-磷酸甘油醛脱氢酶的活性检测就可以推断是否患有此类病，对于疾病的预防有着很大作用。

提取3-磷酸甘油醛脱氢酶的传统方法是将将酵母与其他试剂混合，经过破壁、离心、收集破壁液、干燥、除杂等步骤，十分繁琐，复杂。

目前随着基因工程技术的快速发展，利用微生物生产3-磷酸甘油醛脱氢酶越来越受到研究者的关注，如申请号为201710247131.3的中国发明专利公开了一种互花米草甘油醛3-磷酸脱氢酶SaGAPDH及其编码基因与应用，该互花米草甘油醛3-磷酸脱氢酶SaGAPDH可以催化甘油醛3-磷酸产生1,3-二磷酸甘油酸，而且表达互花米草甘油醛-3-磷酸脱氢酶SaGAPDH的E.coli重组表达菌株与对照菌株相比，提高了耐盐性。又如文献“张咏莉，吴德，余新炳，华支睾吸虫3-磷酸甘油醛脱氢酶重组蛋白的纯化、酶学活性及免疫学研究，《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》,2005,23(4):231-235”中记载了体外制备华支睾吸虫3-磷酸甘油醛脱氢酶重组蛋白(CsGAPDH)，分析其酶学活性及免疫学特性。利用基因工程的方法获取表达重组质粒pGEX-4T-1-GAPDH，并且表达得到华支睾吸虫3-磷酸甘油醛脱氢酶重组蛋白(CsGAPDH)，最后利用重组蛋白(CsGAPDH)免疫小鼠得到多抗。以上两种3-磷酸甘油醛脱氢酶的制备方法均采用基因工程技术，前者得到的3-磷酸甘油醛脱氢酶重组蛋白具有耐盐特性，后者利用3-磷酸甘油醛脱氢酶重组蛋白作为抗原得到多抗，为3-磷酸甘油醛脱氢酶可作为华支睾吸虫病诊断候选抗原提供了免疫学依据。但是以上3-磷酸甘油醛脱氢酶的基因均来自植物和寄生虫，其来自于细菌的3-磷酸甘油醛脱氢酶比较少见。

发明内容

为解决以上问题，本发明提供一种3-磷酸甘油醛脱氢酶及其多克隆抗体。得到了来源于细菌中的3-磷酸甘油醛脱氢酶，而且该3-磷酸甘油醛脱氢酶具有低温酶的特性，制备得到3-磷酸甘油醛脱氢酶的多克隆抗体，能够准确检测3-磷酸甘油醛脱氢酶。

本发明的目的之一是提供一种3-磷酸甘油醛脱氢酶的氨基酸序列；所述3-磷酸甘油醛脱氢酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明的目的之二是提供一种编码3-磷酸甘油醛脱氢酶基因的碱基序列；所述3-磷酸甘油醛脱氢酶基因的碱基序列如SEQ ID NO.2所示。